Analisis microbiologico de ambientes

Análisis Microbiológico de Alimentos con previa Limpieza de Ambiente

1. Objetivo:

1. General:

Analizar el contenido Microbiológico de un Alimento fresco, en este caso, Ensalada de frutas, preparada bajo condiciones poco higiénicas; realizando previamente la limpieza correspondiente de los instrumentos a usar y del ambiente en general.

1. Específicos:

• Conocer el proceso de análisis microbiológico de inspección y lavado de algún recipiente e instrumento.
• Aprender los procedimientos a seguir para la preparación de la porción de ensayo, previo al Análisis Microbiológico.
• Utilizar el método del Número más Probable para el conteo de Coliformes.
• Realizar el recuento de Microorganismos en caso de que sea necesaria su cuantificación.

1. Justificación:

La presente práctica se realiza con el objetivo de aprender a realizar un correcto Análisis Microbiológico a un respectivo alimento, con la finalidad de identificar el tipo de microorganismos que puedan presentarse en el mismo, así de esta manera tener presente que debemos cuidar nuestra salud, evitando comer de cualquier lugar que no tenga las condiciones necesarias para brindarnos un producto higiénico y saludable.

1. Fundamento Teórico:

La microbiología de los alimentos es la parte de la microbiología que trata de los procesos en los que los microorganismos influyen en las características de los productos de consumo alimenticio humano o animal. La microbiología de alimentos, engloba aspectos de ecología microbiana y de biotecnología para la producción, y estudia: microorganismos como productores de alimentos, los microorganismos como agentes de deterioro de alimentos, los microorganismos como agentes patógenos transmitidos por alimentos y principios de control microbiológico de los alimentos. Otros aspectos que se recogen en este curso son: los factores que afectan a la supervivencia de los microorganismos en los alimentos, los métodos generales de análisis microbiológico de los alimentos, generalidades sobre la etiología y epidemiologia de las enfermedades transmitidas por alimentos.

1. Metodología:

1. Descripción de Equipos, Materiales y Reactivos:

1. Equipos:

• Balanza Analítica:

Una balanza analítica es una clase de balanza de laboratorio diseñada para medir pequeñas masas, en un principio de un rango menor del miligramo (y que hoy día, las digitales, llegan hasta la diezmilésima de gramo: 0,0001 g o 0,1 mg). Los platillos de medición de una balanza analítica están dentro de una caja transparente provista de puertas para que no se acumule el polvo y para evitar que cualquier corriente de aire en la habitación afecte al funcionamiento de la balanza. (A este recinto a veces se le llama protector de corriente, draft shield). El uso de un cierre de seguridad con ventilación equilibrada, con perfiles aerodinámicos acrílicos diseñados exclusivamente a tal fin, permite en el interior un flujo de aire continuo sin turbulencias que evita las fluctuaciones de la balanza y que se puedan medida de masas por debajo de 1 μg sin fluctuaciones ni pérdidas de producto.

• Autoclave:

Una autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de éstos, hecho que lleva a su destrucción.

• Incubadora:

Se denomina incubadora a aparatoso con la función común de crear un ambiente con la humedad y temperatura adecuadas para el crecimiento o reproducción de seres vivos.

• Equipo de baño María: El mismo permite mantener temperaturas constantes a un elemento que se encuentre en su interior, las cuales no son demasiado agresivas y no dañaran el producto que contenga dicho elemento.
• Contador de colonias:

Un contador de colonias es un instrumento utilizado para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en una placa de agar. Los primeros contadores sólo eran superficies iluminadas sobre las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con un rotulador en la superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el recuento manual. Los contadores más recientes intentan contar las colonias por vía electrónica, mediante la identificación de áreas individuales de oscuridad y luz, de acuerdo a los umbrales definidos por el usuario, contando los puntos en los que se aprecia contraste, o de modo automático mediante registro electrónico tras presionar con cualquier tipo de marcador.

• Hornilla: Artefacto de funcionamiento a partir de gas o energía eléctrica, el cual genera calor.

1. Materiales:

• 21 Placas Petri
• Piseta
• Vidrio reloj
• Espátula
• Varilla de vidrio
• Mecheros de alcohol
• 3 matraz Erlenmeyer de 1 litro
• Tubos de ensayo
• Algodón
• Gasa
• Termómetro
• Cepillo
• Papel madera
• Pipetas de 1, 5 y 10 ml
• Pro pipeta
• Gradilla

1. Reactivos:

•        Agua Peptonada:

Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y otros materiales de interés sanitario. Esta solución la usamos como diluyente para las siembras de las muestras junto a sus respectivos agares

• Caldo lactosado:

Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia de bacterias del grupo Coliformes en agua, productos lácteos, etc.

Es un medio rico en nutrientes, y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano.

El extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrógeno, mientras que la lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, y éste último se demuestra al usar las campanas Durham.

Se lo usa también como medio de pre enriquecimiento, porque permite recuperar células injuriadas, diluye sustancias tóxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella con respecto a otras bacterias.

• Caldo verde brillante:

Este medio está recomendado para el recuento de Coliformes totales y fecales, por la técnica del número más probable.

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de Coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.

Es una propiedad del grupo Coliformes, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.

• Agar PCA:

Caseína enzimática hidrolizada provee aminoácidos y otros complejos de sustancias nitrogenadas. Extracto de levadura, provee complejo de vitamina B. las muestras son diluidas y diluciones apropiadas son adicionadas en las cajas de Petri. El agar fundido estéril es adicionado a las cajas de Petri y son rotadas suavemente para asegurar una mezcla uniforme de la muestra con el agar. El método del agar vertido sobre las cajas de Petri es preferido al método de inoculación en superficie desde que este de muy buenos resultados. El agar Plate Count es también adecuado para la enumeración y recuento bacteriano en cuartos estériles.

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