Bioquímica PRACTICA N° 2 : “SALADO"

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UNIVERSIDAD DE ORIENTE NÚCLEO BOLÍVAR

ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CIENCIAS FISIOLÓGICAS SECCIÓN DE BIOQUÍMICA: 02

PRACTICA N° 2 : “SALADO" (SALTING OUT) DE PROTEÍNAS, SU[pic 2]

APLICACIÓN EN LA SEPARACIÓN Y DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA Y[pic 3]

GLOBULINAS EN SUERO O PLASMA SANGUÍNEO.[pic 4]

INSTRUCTORA:        INTEGRANTES:

 Zulay Castillo                 Castro Carlos CI: 27.928.844 Donatti Pedro CI: 28.619.698 Marcano Josmarlyn CI: 27.732.850 Noriega Ciscelys CI: 28.373.715 Velásquez Carlos CI: 28.216.556

Ciudad Bolívar, Abril de 2021

Resultados “grupo 1”

Cuantificación de proteínas totales

Determinación de proteínas totales por el método de Biured

Disposición de los reactivos para realizar la cuantificación de las proteínas totales x1.

1.   Curva de calibración:

Se utilizó  el volumen en ml de la concentración estándar de proteínas de los tubos 1 al 4  para determinar la concentración de proteínas contenidos en cada tubo. Para calcular los mg de proteínas en los tubos se parte del estándar de proteína siendo este 8mg/ml, en el que se halla 8 mg de proteínas en 1 ml de solución, así el cálculo se realiza mediante una simple regla de tres utilizando los ml de solución para cada uno de los tubos, presentados en la tabla anterior. El procedimiento se desarrolla a continuación.      

Tubo N° 1 estándar de proteína x1: 0,25 ml:

Si en 1ml de solución --------- Hay 8mg de proteínas

En 0,25ml de solución -------- X =   2mg de proteínas

Tubo N° 2 estándar de proteína x1: 0,50 ml:

Si en 1ml de solución ----------- Hay 8mg de proteínas

En 0,50ml de solución ---------- X=  4mg de proteínas

Tubo N° 3 estándar de proteína x1: 0,75 ml

Si en 1ml de solución -------- Hay 8mg de proteínas

En 0,75ml de solución -------- X=   6mg de proteínas

Tubo N° 4 estándar de proteína x1: 1 ml

Si en 1ml de solución -------- 8mg de proteínas

En 1ml de solución  ---------- X=  8mg de proteínas

Datos suministrados para el ejercicio “grupo 1”

1.     “Una vez establecida la relación de concentración de proteínas en cada tubo, se procedió a realizar la curva de calibración, representando en el eje X los mg de proteínas y en el eje Y las absorbancias para cada tubo. Así como a extrapolar el valor de absorbancia de X1 representados en la gráfica nº 1.

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“grafica nº1”

    Una vez representada la curva, A partir del valor de la absorbancia obtenido de la muestra (0,326), se trazó una paralela a la recta obtenida al graficar los patrones, arrojándonos así la concentración de mg de proteínas que corresponden a la muestra en este caso 4mg

1. Luego de obtener los mg de proteína de x1 por extrapolación, se estableció la siguiente relación para así a partir de los mg de proteínas reflejados en la muestra poder obtener la cantidad de mg de proteínas contenidas en 100ml de suero:

0,1 ml de suero -------- (4mg) x1

100 ml de suero ------- x=?  

 X=  4.000mg/ml de proteínas totales

1. Transformar de mg/ml  a  g/dl: realizaremos esta transformación utilizando el factor de conversión de unidades mediante una simpe regla de tres.

1000mg ----- 1g

4000mg ------- x =?

 X = 4g/dl  de {Proteínas totales}

Cuantificación de albúmina (x2) con el reactivo verde de bromocresol “grupo 1”

En este caso el estándar de proteínas es igual a 40g/dl

Disposición de los reactivos para realizar la cuantificación la albumina  x2

1. Cueva de calibración:

   Se utilizan las concentraciones en ml de los tubos 1 al 4 para así determinar los mg de proteínas contenidos en cada uno de los mismos. Para calcular los mg de proteínas en los tubos se parte del estándar de proteínas a concentración de 40g/dl, en el que se hallan 40g de proteínas en 1dl de solución, así el cálculo se puede realizar mediante una simple regla de tres utilizando los ml de solución para cada uno de los tubos, presentados en la tabla anterior. El procedimiento se desarrolla a continuación.  

Tubo N° 1 estándar de proteína x2: 0,01 ml:

1ml        ------- 40mg de proteína  (concentración estándar)

0,01 ml  ------ x=  0,4mg

Tubo N° 2 estándar de proteína x2: 0,02 ml:

1ml     ----- 40mg de proteínas (concentración estándar)

0,02ml  ------ x= 0,8mg

Tubo N° 3 estándar de proteína x2: 0,03 ml

1ml     ----- 40mg de proteínas (concentración estándar)

0,03ml  ------ x= 1,2mg

Tubo N° 4 estándar de proteína x2: 0,04 ml

1ml     ----- 40mg de proteínas (concentración estándar)

0,04ml  ------ x= 1,6mg

Datos suministrados para el ejercicio “grupo 1”

1.    “Una vez establecida la relación de concentración de proteínas en cada tubo, se procedió a realizar la curva de calibración, representando en el eje X los mg de proteínas y en el eje Y las absorbancias para cada tubo. Así como a extrapolar el valor de absorbancia de MAlbumina  representados en la gráfica nº 2.

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“grafica nº2”

1. Luego de obtener la concentración de Albúmina por extrapolación, que en este caso fue de 0,6 mg de proteínas, se estableció la siguiente relación para así a partir de los mg de proteínas reflejados en la muestra poder obtener la cantidad de mg de proteínas contenidas en 100ml de suero:

0,03ml de suero ------- (0,6mg) x2

100ml de suero --------- x=? mg

X= 2.000mg/ml

1. Transformar los mg/ml  de Albúmina a g/dl: realizaremos esta transformación utilizando el factor de conversión de unidades o por una simpe regla de tres.

1000mg ----- 1g

2000mg ------- x =?

 X = 2g/dl de {Albúmina}

1. Una vez obtenida, las concentraciones de proteínas totales y albúmina, calcular por diferenciación  la concentración de globulinas, sabiendo que:

{Globulinas} = {Proteínas totales} – {Albúmina}

{Globulinas} =  4g/dl – 2 g/dl

{Globulinas} =  2g/dl

Obtuvimos el valor de globulina, mediante las proteínas totales y albúmina en una concentración de g/dl (gramo/decilitro) el cual a través de la operación matemática (resta) se pudo obtener el valor como tal de globulinas el cual es de 2g/dl.

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