Bioquímica y función celular. Informe de Laboratorio

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Bioquímica y función celular

Informe de Laboratorio

Práctica No. 7 13/12/2022

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Determinación de Carbohidratos por Colorimetría

Resumen- En este trabajo se conoció las bases de la colorimetría o espectroscopia visible. Se aplicó la técnica a la determinación de la glucosa en una muestra problema, se adquirió destreza en la aplicación de la espectroscopia y por último se encontró la concentración de la glucosa en la muestra problema. La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. A continuación, se harán espectros de absorción con el fin de determinar la longitud de onda donde la muestra presenta la máxima absorción, y tras realizar las curvas se cuantificará la concentración de glucosa (mg/mL) en una muestra problema. Los resultados de está practica indican que la concentración de M’ tiene un valor de 0,0014 y de concentración final de esta muestra problema es de 0,1 M.

Palabras Clave- Espectrofotometría, transmitancia, absorción, muestras, concentración, solución, longitud de onda.  

1. Introducción

La determinación de carbohidratos por colorimetría es un método utilizado para medir la cantidad de carbohidratos en una muestra. Se basa en la propiedad de los carbohidratos de reaccionar con ciertas soluciones para formar compuestos de color, y la intensidad del color es proporcional a la cantidad de carbohidratos presente en la muestra. La ley de Beer y Lamber consiste que la absorbancia de una solución es directamente proporcional a la concentración de una sustancia en esa solución y al camino recorrido por la luz a través de la solución [1]. Se expresa matemáticamente como:

                                         A = abc                               (1)

Donde A= es la absorbancia, a= la absortividad de la sustancia, b= es la longitud de del camino óptico y c= la concentración de la sustancia de interés. La ley de Beer-Lambert es ampliamente utilizada en la espectroscopía para medir la concentración de una sustancia en una solución, y se aplica a una gran variedad de sustancias y longitudes de onda, incluyendo la luz visible, ultravioleta e infrarroja [1].

La espectrofotometría es una técnica analítica que se utiliza para medir la cantidad de una sustancia en una muestra, basándose en la absorción o la transmisión de luz a través de la muestra. La luz es dirigida a través de una muestra y la cantidad de luz que atraviesa la muestra se mide para determinar la concentración de una sustancia específica [2].

A medida que el haz monocromático pasa a través de un medio homogéneo, la intensidad del haz monocromático disminuye exponencialmente a medida que aumenta aritméticamente la concentración de las especies absorbentes. Esta ley (Beer y Lamber) se utiliza en los laboratorios para implementar métodos que permitan la cuantificación de muestras utilizando diversos tipos de espectrofotómetros. [3].

La transmitancia del compuesto en solución se define como la fracción de luz incidente que es transmitida:

                     Transmitancia = T = P/Po                                (2)

Donde P=   la intensidad del rayo de luz transmitido, Po= la intensidad de la luz incidente.

 Porcentaje de transmitancia:

                Porcentaje de T= %T = P/Po x 100                      (3)

A medida que aumenta la concentración de un compuesto en una solución, la solución absorbe más luz y emite menos luz. El porcentaje de reducción de la permeabilidad es inversa y logarítmicamente proporcional a la concentración. Sin embargo, es más conveniente utilizar la absorbancia A, que es proporcional a la concentración. por lo que entonces:  

                   A = -log P/Po = - log T = log 1/T                       (4)

Los objetivos principales de este informe es conocer las bases de la colorimetría o espectroscopia visible, aplicar la técnica a la determinación de la glucosa en una muestra problema, adquirir destreza en la aplicación de la espectroscopia y medir la concentración de la glucosa en la muestra problema.

1. MÉTODOS

La práctica de determinación de carbohidratos por colorimetría se llevó a cabo con los materiales y equipos del laboratorio de química en la Universidad de los Llanos, Villavicencio, Meta. La experiencia se dividió en tres partes, inicialmente se empezó con la preparación de los patrones y de la muestra problema, posteriormente se rotuló siete tubos de ensayo agregando los reactivos de la tabla 1.

Luego se tomó nuevamente siete tubos de ensayo, que se rotularon como B’, 1’, 2’, 3’, 4’, 5’ y M, a los seis primeros se colocó un mL de cada una de las soluciones anteriores con su orden. En el tubo M se colocó un mL de la muestra. En cada uno de los tubos se agregó desde el B’ hasta el M’cuatro mL de reactivo o-toluidina, para observar el color. Seguidamente se llevó a calentar en baño de agua hirviendo durante 30 minutos, se colocó antes en la boca de los tubos un pedazo de aluminio para evitar pérdidas de evaporación.

En la segunda sección o parte se elaboró la curva espectral o espectro de absorción donde se tomó dos celdas del espectrofotómetro y una de ellas se colocó el blanco y en el otra el contenido del tubo 3’. Luego con la solución B’ se ajustó el espectrofotómetro a 0 de absorbancia. Se sacó la celda y se colocó en ella con solución del tubo 3’, se leyó la absorbancia a 550,570, 590, 610, 630, 650, 670, 690 y 710 nm. En cada lectura se debió colocar el blanco y ajustar el aparato al 100% de la transmitancia.

En la última sección se elaboró la curva de calibración, se cuadró el espectrofotómetro en la longitud de la onda donde arroje la mayor absorción y se determinó la absorbancia para todas las soluciones patrón preparadas (1'', 2', 3', 5') al igual que la muestra M’.

1. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

A continuación, se presentan los resultados que corresponden a la experiencia en laboratorio, sus respectivos cálculos y la interpretación de estos mismos:

Cálculos

1. Cálculos para hallar los valores de transmitancia y porcentaje de transmitancia con la absorbancia a cada longitud de onda.

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1. Longitud de onda 550 nm

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1. Longitud de onda 570 nm

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1. Longitud de onda 590 nm

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1. Longitud de onda 610 nm

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1. Longitud de onda 625 nm

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1. Longitud de onda 630 nm

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1. Longitud de onda 635 nm

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1. Longitud de onda 650 nm

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1. Longitud de onda 670 nm

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1. Longitud de onda 690 nm

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1. Longitud de onda 710 nm

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1. Cálculos para hallar los valores de concentración de glucosa (mg/mL) para cada muestra.

Ecuación para hallar la concentración: [pic 34]

Despejar la ecuación: [pic 35]

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