CURSO HPLC-QUERCETINA

PRÁCTICA N° 1

1. OBJETIVO:

Determinar Quercetina en Allium cepa L. (cebolla)   y Malus domestica (manzana) por HPLC

1. INTRODUCCIÓN:

Los flavonoides son metabolitos secundarios ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Son los responsables de la coloración de las plantas y están formados por estructuras fenólicas variables. Las frutas, los vegetales, los granos y las flores, que los contienen en cantidades considerables, han sido utilizados por sus efectos benéficos en la salud mucho antes de la identificación de los flavonoides como principios activos.

De todos los flavonoides reportados, la quercetina (fig. 1.8) es el más abundante. Ésta pertenece al subgrupo de las flavonas y se encuentra presente en la cebolla, la manzana, el brócoli y las frutillas. Se ha estimado que contribuye con el 60 – 75 % de la ingesta diaria de flavonoides y es absorbido en el intestino en cantidades significativas. Puesto que tiene un tiempo de vida media largo, el consumo de alimentos que lo contienen favorece su acumulación en la sangre (Hollman et al, 1997).

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En relación a todo lo antes mencionado, se requieren métodos de análisis validados que permitan la determinación del contenido de estas sustancias en alimentos y en fluidos biológicos  para así estimar la relación de su consumo  con la incidencia de alguna enfermedad o protección contra las mismas.

1. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

1. Materiales

1. Materiales de Laboratorio:

• 1 Mortero
• 1 Frasco hermético
• 1 Balón fondo redondo
• 1 Balon de 50 ml
• 1Vaso de precipitación 150ml
• Fiola de 250 ml
• Filtro de membrana
• Filtrojeringa
• Jeringas de 3cc
• Viales ambar de 1.5 ml

1. Material Vegetal

• 10 g de Allium cepa L. (cebolla)
• 5g  de Malus domestica (manzana)

1. Reactivos:

- Metanol

- Agua destilada

- Dietil ditio carbamato

- HCL 6N

- KH2PO4 q.p.

- Ácido fosfórico al 2%.

- Metanol grado HPLC

- Acetonitrilo

- Estándar Quercetina grado HPLC (Sigma)

1. Equipo:

• Balanza analítica
• Equipo para reflujo
• Equipo de Soxhlet
• Equipo de filtración al vacío
• Equipo para HPLC Agilent 1100 con arreglo de diodos

1. MÉTODO

1. Preparación de la muestra

1. Allium cepa L.(cebolla):

Triturar 10 g de cebolla en un mortero. Luego colocar el triturado en un frasco hermético y llevar a refrigeramiento de un día para otro. Pesar 0.250g de la muestra y llevar a balón de fondo redondo. Adicionar 12.5 ml de metanol, 7.5 ml de agua destilada, 40 mg de dietil ditio carbamato de sodio y 5ml de HCL 6N. Mezclar y cerrar el sistema. Dejar en reflujo durante 1.5 horas a 90°C. Dejar enfriar hasta temperatura ambiente protegido de la luz. Luego llevar a un balón de 50 ml y completar a volumen con metanol. Filtrar la solución y conservarla en frascos ámbar bajo refrigeración. Previo al análisis, llevar la solución a temperatura ambiente, filtrar (filtrojeringa) y colocar en viales ámbar.

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