Cromatografía

Tarea: “Cromatografía”

“Cromatografía”

La cromatografía es un método físico de separación que se basa principalmente en la separación de los componentes de una mezcla mediante dos fases: una fase estacionaria que se encarga de retrasar el paso de los componentes de la muestra y una fase móvil que puede ser un gas o líquido que pasa a través de la fase estacionaria.

La cromatografía en capa fina (TLC, CD, CCF) se utiliza para separar moléculas pequeñas tales como metabolitos secundarios, azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, cadenas cortas de polipéptidos y ácidos nucleicos. Consiste de una fase estacionaria, una fase móvil, principio de adsorción y reparto.

El principio de adsorción se refiere a la retención de una especie química en los sitios activos de la superficie de un sólido, a diferencia de la absorción donde se retiene una especie química por parte de una masa, es decir, se relaciona con el volumen de una masa y depende de la tendencia que tiene ésta de formar una mezcla o reaccionar químicamente.

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Para la aplicación de la muestra, es necesario marcar 1cm del borde en un extremo de la placa (fase estacionaria), posteriormente la muestra se aplica colocando un punto, macha o banda en el borde marcado. Después la fase móvil se coloca en la cámara y enseguida se coloca la placa con la muestra aplicada. Se tapa y se deja correr durante algunos segundos. El disolvente (fase móvil) sube por capilaridad e

irá arrastrando las moléculas más afines a la fase estacionaria. El desarrollo termina una vez que la fase móvil recorrió la fase estacionaria hasta 1 cm del borde de

superior de la placa. [pic 2][pic 3][pic 4][pic 5][pic 6][pic 7][pic 8][pic 9][pic 10]

Hay que tener en cuenta que el disolvente debe tener menos de 1 cm de profundidad para evitar el contacto directo con las muestras, se debe tapar la cámara para evitar la volatilización del disolvente. Se debe dejar secar la placa y hay que observar el color y forma de las manchas.

Una vez que la muestra se corrió, se procede al revelado, esto con el fin de visualizar los componentes presentes. Los reveladores que se utilizan son:

• Luz UV: los componentes toman radiaciones de esta frecuencia y se observa fluorescencia.
• I2: es un revelador universal, volátil y se fija por uniones dipolo inducido a las zonas donde están los compuestos dando manchas marrones o amarillentas. La ventaja es que una vez que la placa es retirada de la cámara con I2, esta comienza a decolorarse por la volatilización del iodo.
• H2SO4 con calor: la placa es rociada con H2SO4 concentrado (50%) y es colocada en una estufa por unos minutos, posteriormente la placa se retira y aparecen manchas marrones, pardas, rojizas, opacas.
• Reactivos de color: estos reactivos con específicos para cada grupo químico o compuesto.

El número de manchas reveladas indica el grado de pureza de la muestra.

Las muestras corridas tienen una velocidad de migración y están gobernadas por las solubilidades relativas en la fase estacionaria y la fase móvil. Cada soluto se distribuye entre ambas fases de acuerdo al coeficiente de partición o relación frontal, el cual está dado por:

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