Cromatografía

Cromatografía

Principio básico

Separación de mezclas por interacción diferencial de sus componentes entre una Fase estacionaria (líquido o sólido) y una Fase móvil (líquido o gas)

Técnica de separación, mediante la cual vamos a eludir un analito.

Fase móvil

La cual se encargará de eluir la muestra a través de sistema cromatográfico.

Fase estacionaria

La cual va a interactuar con la muestra para separar los diferentes componentes, adsorbiendo la muestra de diferentes maneras. (según afinidad, tamaño etc.).

Tiempo de retención TR:

Tiempo transcurrido al momento de eluir el máximo de la concentración de un compuesto

• Tiempo en que un analito recorre toda la longitud del sistema, desde el inicio de la inyección al ápice del pico cartográfico.

Agrupa una serie de métodos de separación, la cual se efectúa por la distribución de las sustancias o analitos entre dos fases, una de ellas es móvil la cual fluye continuamente y la otra permanece estacionaria.

La SORCIÓN es el proceso mediante el cual un analito se distribuye desde la fase móvil a la fase estacionaria.

Existen 4 mecanismos de sorción Adsorción, Partición o reparto, Intercambio iónico y exclusión de talla.

• Adsorción: El soluto es retenido   en la superficie de la fase estacionaria a través de interacciones químicas o físicas.
• Partición: El soluto se disuelve en la parte líquida que envuelve la superficie del soporte sólido.
• Intercambio iónico: El ion de la muestra se fija a la carga (grupo funcional) de la fase estacionaria.  
• Exclusión molecular:  Las moléculas son separadas por tamaño, siendo retenidas las mayores.      

Factor de capacidad Mide la distribución molar del soluto en la fase estacionaria y la fase móvil (depende de la temperatura, determina la cantidad de muestra que se puede inyectar).

Selectividad Mide la habilidad de la columna para distinguir entre dos componentes. Se optimiza por la elección de la fase móvil y la estacionaria.

Resolución Mide el grado de separación entre dos componentes. Mide la distancia entre dos picos y el ancho de ambos picos.

Cromatógrafo de gases instrumentación: gases –inyectores-horno de la columna-detector-salida de la señal

Gases auxiliares MakeUp FID, ECD, FPD, PID, NPD) hidrogeno, helio, argón

Referencia nitrógeno, helio, argón

Flama (FID, NPD, FPD) • Aire• Hidrógeno

Trampas y reguladores

Trampas: Humedad (A)O2, CO2 (C)Hidrocarburos (B)

Inyector

Split vaporiza y elimina la mayor parte de la muestra

Splitless vaporiza y transfiere la mayor parte de la muesta a la columna

columnas: empacadas y capilares

Selección de columnas: material, selectividad de fase estacionaria, diámetro INT

columnas capilares

• no polar: Dimetilpolisiloxano
• polar: Polietilenglicol

Dimensiones de la columna

L = Largo de columna (m)

dc = Diámetro interno (mm)

df = Espesor de película de fase (µm)

Detectores

• Universal - FID, TCD
• Semi-específico- ECD, PID (Foto-Ionización).
• Específico - NPD, FPD, HECD (Hall Conductividad Electrolytic)
• Conformational - Stacked ECD/FID, ECD/NPD, ECD/FPD, Series PID/HECD
• Mass Spectrometry Detectors

FID deteccion de iones, respuesta universal/Es 100 veces más sensible que el TCD. /Mayoría de los compuestos con Carbón.

Condiciones de operación

• Det. Temperature = 250°C
• H2   = 35 ml/min
• Air = 350 ml/min
• N2 make-up (improves sensitivity) = 30 ml/min

TCD Mide los cambios de conductividad térmica del gas de arrastre.

• Block Temperature                       200°C
• Transfer Temperature                   190°C
• Constant Filament Temp              NO
•  Filament Voltage                           10V
•  Filament Temp Limit                     450°C

Electron Capture Detector Responde a compuestos que tienen grupos funcionales electronegativos.

• Nitobencenos, fenoles, oxalatos, cetonas, fumaratos, esteres pirúvico y fumárico, y organometálicos.
• Base body temp.   =300 °C
• ECD temperature   = 320 °C
• Make up gas (N2) = 30-40 mL/min

Nitrogen Phosphorous Detector Respuesta específica vs N y P compuestos orgánicos.

• Detector temperature = 300°C
• Hydrogen flow    = 2-3 ml/min
• Air flow                     = 70 ml/min  -Make-up flow (N2)          = 10-15 ml/min

Detector fotométrico de llama

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