Cultivo De Anteras

CULTIVO DE ANTERAS

El cultivo de anteras (CA)es una técnica por medio de la cual es posible producir líneas homocigotas a partir de poblaciones segregantes,mediante el doblamiento cromosómico del polen haploide y la regeneración de plantas en un ciclo de cultivo invitro.En contraste por los métodos estándar de fitomejoramiento normalmente se requieren seis generaciones de autofecundación para alcanzar la completa homocigosis en palntas autogamas

DESARROLLO DEL CULTIVO DE ANTERAS

Se desarrolla en dos etapas principales :

 Inducción de microcallos

 Regeneración de plantaas

INDUCCION DE MICROCALLOS

En una primera face del C.A. se induce la formación de microcallos colocando las anteras en un medio cuya composición estimule selectivamente la división mitótica de las microspóras , a expensas de las células somaticas en el filamento, el tejido conectivo y la pared de la antera .El medio para inducir esa formación debe tener altas concentraciones de auxinas .

El arroz, el estado de polen optimo para esa inducción es el comprendido entre el unicleado tardio y binucleado temprano .

A los 20 dias de cultivo se forma una masa diferenciada de tejido llamada microcallo, el cual contiene mas de 100 celulas por cada microspora involucrada en el proceso . el microcallo alcanza un tamaño de 2 mm alrededor de los 30 o 50 dias

Dependiendo del genotipo , este tamaño es el mas apropiado para empezar el proceso de regeneración de plantas .

En la sgte figura :

A. Formación de microsporas

B. Maduración del garno de polen

C. ,D, Y E.DIVISION MITOTICA RESPECTIVAMENTE DE LA MICROSPORA

F. Formacion de plantas via embriogénesis u organogénesis a partir del callo

REGENERACION DE PLANTAS

Una vez que los microcallos han alcanzado una longitud de 2 mm son tranferidos a un medio de cultivo con menor concentración de auxinas, pero alto en concentración de citoquininas , estas estimulan la diferenciación de las células de los microcallos hasta regenerar la planta

FACTORES Q INFLUYEN EN EL CULTIVO DE ANTERAS

• Genotipo de la planta donante

• Fisiología de la palnta donante

• Estado de desarrollo del grano de polen

• Pretratamientode las anteras

• Medio de cultivo

• Albinismo

Preceso q se sigue para el cultivo de anteras

1. Siembra del material donante (la variedad o especie es fundamental )

2. Selección de planta (morfológicamente y fisiológicamente optimo, se selecciona antes de floración )

3. Selección de panojas (3cm -6 cm )

4. Determinación del estado de desarrollo del polen (uninucleado tardio y binucleado temprano

5. Pretratamiento de las anteras

6. Esterilización superficial de la panojas

7. Aislamiento y siembra de anteras

Pasos :

A. Se toma la panoja y se hace corte en la base ,en la punta y en la parte ventral

B. Se divide en tres partes y nos quedamos con el tercio medio

C. Se extraen las anteras y se colocan en agua destilada para evitar deshidratación

D. Se destapa el tubo de ensayo con el medio de cultivo y se esteriliza con fuego

E. Se toman las anteras con el bisturí y se ponen en le centro del puente del tubo de ensayo para q el embrión se alimente por capilaridad

F. Se vuelve a cubrir el tubo de ensallo y se asegura con parafilm

G. Se coloca estiquer con datos y se lleva a oscuridad

8. Cultivo de anteras y formación de microcallos

9. Tranferencia de los microcallos al medio de regeneración

Temperatura (24-25)C con luz indirecta hasta los 7 dias, después con luz

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