Deternimación Y Cuantificación De Proteinas

• Métodos de Cuantificación y determinación de Proteínas

Los métodos que actualmente se utilizan para cuantificar proteínas se basan en la capacidad de las proteínas para absorber la luz ultravioleta, la capacidad de formar derivados químicos y la capacidad para unir colorantes.

I. Métodos de Biuret.

Este método está basado en la formación de un colorante entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptídicos, por lo que la intensidad del colorante es proporcional a la cantidad de proteínas. Este método es muy específico ya que aunque existan contaminantes en el medio la posibilidad de que alguna sustancia interfiera es muy baja. Sin embargo este método tiene la desventaja de que es muy poco sensible por lo que es necesario realizar la cuantificación en soluciones muy concentradas.

II. Método de Brandford

Esté método está basado en la unión del colorante Comassie Blue G-250 a la proteína. El colorante se encuentra en una solución ácida, la cual contiene dos partes del colorante (azul y naranja), las proteínas se unen al sitio azul haciendo posible su cuantificación. Este método tiene la ventaja que es muy sensible, relativamente rápido y económico. Por otro lado tiene la desventaja que si la solución tiene un pH básico o hay presencia de algún detergente, la cuantificación no podrá ser realizada.

III. Método de BCA

Esté método lleva el nombre del reactivo que utiliza, ácido bicinconínico o sal sódica. Este reactivo es un compuesto alcalino que presenta un color púrpura en presencia de iones Cu1+ , el cual es formado a partir de la interacción de las proteínas con el ion Cu2+ en un medio alcalino. Este método tiene la ventaja de ser rápido, muy sensible y no se ve afectado por la intervención de otras sustancias. Sin embargo este método tiene que llevarse acabo forzosamente en un medio alcalino, el cual hay que mantener durante todo el experimento.

(Fernandez E., 1995)

• Análisis cuantitativos

1. Gravimetría

2. Volumetrías: ácido base, REDOX, precipitación, complejación, titulación.

3. Potenciometría

4. Voltamperometría

5. Espectrofotometría

6. Fluorimetría

7. Espectrofotometría atómica

8. Cromatografía

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