Discusion. Conclusiones

Discusión

A continuación, se dará a conocer la diferencia entre el Kit de Promega utilizado en el laboratorio de genética en comparación con el método de extracción y purificación y extracción de Tectona grandis L.

Para comenzar el buffer que utiliza en el método del kit Promega se utiliza el buffer llamado DNA Rehidratation que se agrega al final con el fin de proteger el ADN. En el método de Tectona se le agrega el buffer CTAB al inicio de la extracción, El CTAB es un detergente catiónico que tiene la propiedad de precipitar ácidos nucleicos y polisacáridos ácidos en soluciones de baja concentración iónica. Bajo estas condiciones las proteínas y los polisacáridos neutros permanecen en solución.

En el método de Promega Kit para comenzar se maceró una capa de la cebolla y luego se le agrega la solución de Cell Lysis Solution para poder romper la membrana celular. En el método Tectona se utilizó Nitrógeno líquido para poder macerar el tejido vegetal.

Luego de macerar centrifugar en los diferentes métodos; el método de tectona le agregó cloroformo isoamílico, En cambio en el método de del kit Promega se agregó al pellet el compuesto de “Nuclei Lysis Buffer” Luego ambas sustancias se pasarán por el vortex. Después de que ambas sustancias pasaron por este procedimiento del vortex; en el caso del método de Tectona se le agregará una cantidad igual de isopropanol.

 En el caso del Kit Promega se le agregará RNasa que va a catalizar la hidrólisis del ARN. Posterior a ello se incubará y se le agregará “Protein Precipitation Solution”, para separar las proteínas que protegen al ADN. En este Kit el isopropanol se agrega de penúltimo para purificar y concentrar el ADN. Por ultimo se agrega DNA Reidratation para proteger al ADN.

En el caso de Tectona el RNAasa, se le agrega, por último, después de haber hecho el secado del pellet con etanol. La visualización del DNA obtenido se efectuó mediante electroforesis en un gel de agarosa al 1.2% empleando el procedimiento descrito por Rick Wood y Hames (1990).

Conclusiones

• El método de extracción de ADN, también se puede hacer de forma casera; cuando se hace por forma casera el ADN no quedará tan puro como los resultados de un laboratorio profesional.

• La extracción de ADN de una célula de origen animal y vegetal radica en el hecho de que la célula vegetal tiene una membrana celular, para poder romper esta membrana se debe de utilizar un reactivo capaz de romperla.

• Para obtener unos resultados mas fidedignos se debe de eliminar todo aquello que no sea el ADN, ya que, como se pudo observar en esta práctica de laboratorio se eliminó la pared celular, proteínas que rodean el ADN y la membrana nuclear.

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