EFECTO REPARADOR DE Piper aduncum L. matico EN TEJIDOS EMBRIONARIOS

EFECTO REPARADOR DE Piper aduncum L. matico EN TEJIDOS EMBRIONARIOS DE Allium cepa L. cebolla CON LESIONES CROMOSÓMICAS INDUCIDAS POR CIPROFLOXACINA

THE EFFECT REPAIR OF PIPER ADUNCUM L. MATICO IN EMBRIONARIES TISSUE OF ALLIUM CEPA L. ONION WITH CHROMOSOMAL LESIONS INDUCED POR CIPROFLOXACINA

(borrar)1Luis Felipe Gonzales Llontop^[1]

                                                                  RESUMEN

Se determinó el efecto reparador de un Piper aduncum L. “matico” en tejidos embrionarios de Allium cepa L. “cebolla” con lesiones cromosómicas inducido por ciprofloxacina donde se seleccionó raicillas de 2,5 cm de 45 bulbos de Allium cepa L. a fin de asegurar una cinética de mitosis constante de la muestra. Se usó un diseño experimental con 5 grupos tratados, fijándose las raicillas cada 10 minutos para detectar las células en diversos momentos de mitosis de la siguiente onda de división; luego, se aplicó la técnica de coloración rápida de Tjio y Levan. Los tejidos embrionarios de A. cepa L. “cebolla” que fueron inducidos por ciprofloxacina 0,5% presentaron reordenamiento cromosómico (9,6%) y sin aberraciones (89,4%) mientras que el grupo comparativo que recibió ciprofloxacina 0,5% más P. aduncum L. mostró reordenamiento cromosómico (2,2%) y sin aberraciones (97,8%). Respecto al grupo control que recibió ciprofloxacina 1% exhibió: puente (15,8%), fragmentaciones (5,2%), reordenamiento (14,6%) y sin aberraciones (64,4%) mientras el grupo cuatro que recibió ciprofloxacina  más matico indicó: puente (7,6%), fragmentaciones (2,3%), reordenamiento (4,4%) y sin aberraciones (85,7%). Se confirmó el notable efecto reparador de P. aduncum L. al encontar que las diferentes aberraciones cromosómicas halladas disminuyeron porcentualmente y se presenta la posibilidad de que A. cepa L. se constituya en componente de un bioensayo que identifique el perfil genotóxico de los potenciales fármaco-mutagénicos que actualmente se consumen en nuestro país.

Palabras claves: efecto reparador, lesiones cromosómicas, Piper aduncum L. “matico”, genotóxicidad, ciprofloxacina.  (EN ORDEN ALFABÉTICO)

ABSTRACT

The remedial effect of Piper aduncum L. "matico" in embryonic tissues of Allium cepa L. "onion" with ciprofloxacina induced chromosomal damage where rootlets 2.5 cm 45 bulbs of Allium cepa L. was selected is determined so to ensure constant mitosis kinetics sample. An experimental design was used with five treatment groups, noting rootlets every 10 minutes to detect cells at different times of mitosis of the next wave of division; then, the technique of rapid coloring and Levan Tjio applied. Embryonic tissues of A. cepa L. "onion" were induced by ciprofloxacina 0.5% had chromosomal rearrangement (9.6%) without aberrations (89.4%), while the comparison group received ciprofloxacina 0.5 % more aduncum P. L. showed chromosome (2.2%) without aberrations (97.8%) rearrangement. The control group received 1% ciprofloxacina exhibited: bridge (15.8%), fragmentation (5.2%), rearrangement (14.6%) without aberrations (64.4%) while the fourth group received ciprofloxacina more matico said: bridge (7.6%), fragmentation (2.3%), rearrangement (4.4%) without aberrations (85.7%). Citoreparador remarkable effect of P. L. aduncum to find that the different chromosomal aberrations found percentage decreased and the possibility of A. cepa L. component is constituted in a bioassay to identify genotoxic drug profile presented potential confirmed -mutagenic currently consumed in our country.

Keywords: restorative effect, chromosomal damage, Piper L. aduncum "matico" genotoxicity ciprofloxacina.

INTRODUCCIÓN

En pleno siglo XXI la vida de la humanidad está propensa al consumo de sustancias químicas indeseables tales como el ciprofloxacina (Goldstein et al., 1979) cuyo uso para sofocar ciertas dolencias en el ser humano ya sea por prescripción médica y/o automedicación y que sin medir sus consecuencias (efectos colaterales) conjuntamente acompañado con agentes externos (estrés) puede iniciar el nacimiento de una proliferación celular  maligna a nivel gástrico (Cairns, 2010).  

Los procesos de reparación del ADN es uno de las vías principales para la comprensión de los fenómenos cancerígenos, desarrollo individual y envejecimiento humano (Dubinin, 2005; Hayflikc, 2008). Ya Gonzáles en el Año 2002 usando un concentrado de aminoácidos logró reparar tejidos meristemáticos de Vicia faba L. “haba”  dañados por el herbicida 2,4-Diclorofenoxiacetico.

Los trabajos sobre cambios celulares en tejidos han permitido entender que ciertos agentes químicos (Gonzáles, 2004) como el 2,4-Diclorofenoxiacetico, el  metilcolantreno, el benzopireno y otros agentes más usados como conservantes de alimentos, en un momento determinado pueden originar una cascada de células transformadas (malignas). Su centro de ataque de estos mutágenos se centraría en el núcleo de las células donde ocasionaría múltiples aberraciones cromosómicas; clave biológica para la posterior transformación celular (Devoret, 2008).

       Piper aduncum L. “matico” (Lezaeta, 2012) es una especie nativa de Perú, Chile y Argentina. La medicina popular le atribuye al matico, propiedades cicatrizantes, es así como el té o infusión de las hojas es usado en forma tópica para el tratamiento de heridas, de quemaduras, inflamaciones, dolor de garganta, tos, úlceras externas e internas, etc.

Con los resultados se pretende aportar evidencias de la posibilidad de constituir el infuso de Piper aduncum L. “matico” en componente de una estrategia preventivo-terapéutico de bajo costo, que pueda contribuir al restablecimiento de la salud de las personas y nos  permita identificar el perfil toxicológico de los compuestos químicos (ciprofloxacina), son usados y consumidos actualmente en el País.

 El presente trabajo tuvo como objetivos: determinar el efecto reparador de Piper aduncum L. “matico” en Allium cepa L. con lesiones cromosómicas inducido por ciprofloxacina y determinar la posibilidad de que A. cepa L. se constituya en componente de un bioensayo que identifique el perfil genotóxico de los potenciales fármaco-mutagénicos que actualmente se consumen en nuestro país.

MATERIAL Y MÉTODOS

(indicar laboratorio donde se realizó la investigación, y procedencia de las muestras)

Tratamiento de las raicillas de Allium cepa L.: Se trabajó con 45 bulbos de Allium cepa L.  “cebolla” variedad arequipeña. El número de bulbos utilizado por tratamiento fue de 09 y se hicieron 05 tratamientos. Los bulbos fueron mantenidos en agua constantemente, renovada bajo permanente aireación en oscuridad y a temperatura de 20ºC. Tres  días después se seleccionaron solamente las raicillas que tuvieron una longitud promedio de 2,0 cm para el grupo control, grupo experimental y grupo testigo, a fin de asegurar muestras con cinética de mitosis constante. Se evaluó 1,000 células por cada raicilla observadas en 100 campos microscópicos (Beltrán & Gonzales, 1995).    

                Determinación del tiempo del ciclo celular promedio de la población mononucleada de Allium cepa L.: Se determinó tomando como base la duración de la onda celular binucleada de Allium cepa L. usando cafeína 0,1%. Se tomó como “hora cero”  la exposición de las raicillas de Allium cepa L. “cebolla” en cafeína 0,1 % para todos los tratamientos (Vann” Hoff, 1968).  

Para tal efecto, se estableció previamente los índices interfásicos y mitótico promedio, que ya fueron determinados por De La Torre et al., (1999) comprendiendo las duraciones promedio (tiempo) de la interfase y de las 04 fases de la mitosis siendo de 11 horas y 02 horas respectivamente. El periodo duplicativo “S” estuvo separado en dos grandes segmentos llamados temprano y terminal cuyos tiempos fueron de 02 horas por segmento y que ya fueron establecidos  (Stent & Calendar, 1997).

Estudio experimental

El diseño experimental es un diseño clásico donde se utilizó cinco grupos (01 grupo testigo, 02 grupos control y 02 grupos comparativos. Se tomó en consideración que las aberraciones cromosómicas pueden ser adecuadamente inducidas en el periodo terminal de la duplicación del ADN (Stent & Calendar, 1997); (Alberts et al., 2005). Se separó el período duplicativo “S” en dos grandes segmentos llamados temprano y terminal buscando inducir tanto el daño cromosómico por el ciprofloxacin así como estimular  la acción reparadora del extracto de Piper aduncum L. “matico”. En el grupo A (Testigo)  se sometió las raicillas de Allium cepa L. por 13 horas en agua pura. En el grupo B (control) las raicillas de Allium cepa L. fueron  sometidas a una dosis de ciprofloxacina 0,5 % a partir de la cuarta hora hasta la octava, disuelto en agua destilada. Luego a partir de la novena hora hasta la 11 ava. se mantuvieron en agua pura para su recuperación. En el grupo C (control), las raicillas de Allium cepa L. fueron sometidas a una dosis de ciprofloxacina 1 % a partir de la cuarta hora hasta la octava,  disuelto en agua destilada; luego a partir de la novena hora hasta la 11 ava. se mantuvieron en agua pura para su recuperación. En el grupo experimental D las raicillas de Allium cepa L. fueron sometidas a partir de la cuarta hora hasta la octava en una combinación de ciprofloxacina 0,5 % y el infuso de Piper aduncum L. “matico” (comprendiendo el periodo temprano y terminal del período replicativo “S”). Luego a partir de la novena hora hasta la 11 ava. se mantuvieron en agua pura para su recuperación. En el grupo experimental E las raicillas de Allium cepa L. fueron sometidas a partir de la cuarta hora hasta la octava en una combinación de ácido ciprofloxacina 1 % y el infuso de Piper aduncum L. “matico” (comprendiendo el periodo temprano y terminal del período replicativo “S”). Luego a partir de la novena hora hasta la 11 ava. se mantuvieron en agua pura para su recuperación. Finalizada la 11 ava. hora y hasta la 13 horas, todos los grupos fueron  sometidos en agua pura. Terminado el proceso (Gonzales, 2009), las raicillas fueron  disectadas, prosiguiéndose según la técnica rápida de Tjio y Leván que tienen los siguientes pasos: fijación de las raicillas en Carnoy, coloración con orceína acética clorhídrica 1%, aplastamiento o squash de las raicillas, observación en microscopio a 400x y 1000x y fotografiado de las fases celulares deseadas.

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