Extraccion De Adn Animal

RESUMEN

Los ácidos nucleicos son macromoléculas construidas en forma de cadena larga de polímeros llamados nucleótidos. Su función principal es almacenar y transmitir información genética, pero también pueden desempeñar funciones estructurales. Para determinar de forma cualitativa la presencia de ADN en una muestra de tejido vegetal como el banano se realizó una maceración, en donde al producto que se obtuvo se le adicionó una solución salina, seguido de unas gotas de champú, posteriormente se centrifugó y finalmente al sobrenadante obtenido se le agregó etanol absoluto frío. El resultado que se logró fue la formación de tres capas, en donde la capa intermedia presentaba un color blanco en el cual se visualizó los ácidos nucleicos.

INTRODUCCIÓN

El ácido desoxirribonucleico (ADN), es un ácido nucleico que contiene información genética usada en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos y algunos virus;

Los ácidos nucleicos son macromoléculas que se encuentran tanto en el núcleo como en el citoplasma celular. Estas contienen información genética usada en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos y de algunos virus; y es responsable de su transmisión hereditaria. El ADN está compuesto por una secuencia de nucleótidos formados por un azúcar (desoxirribosa), una base nitrogenada (adeninaA, timinaT, citosina C, guaninaG) y un grupo fosfato que los une entre si. Se presenta como una doble cadena, en la que las dos hebras están unidas entre sí por unas conexiones denominadas puentes de hidrógeno.

La extracción y determinación cualitativa de los ácidos nucleicos como el ADN se puede realizar por una variedad de métodos, depende mucho de las propiedades fisicoquímicas de dicho compuesto. Para aislar los componentes del material nucleico se utilizan varios procedimientos, cromatografía de columna, electroforesis en gel de acrilamida, ultracentrifugación en gradiente de densidad. Aplicando experimentalmente el método decentrifugación, se llevó a cabo la extracción y determinación cualitativa del material genético de un tejido vegetal (banano), mediante el uso de solución salina (NaCl 2M), champú y etanol absoluto frío.

PROCEDIMIENTO

Después de situarse en el área de trabajo se predispusieron los materiales a utilizar durante la práctica. Primero se realizaron una serie de cálculos. Estos se efectuaron para saber cuánto era la cantidad de soluto en este caso NaCl, que se iba a necesitar para preparar una solución de 25 ml de NaCl.

Los cálculos se efectuaron y dieron los siguientes resultados:

M= nSto/ v s/n (lts).

nSto= M x v s/n. (lts).

nSto= 2M x 0.025 lts.

nSto = 0.05 moles NaCl.

nSto= m / Pm.

m= nSto x Pm.

m= 0.05 moles NaCl x 58.3 gr / mol NaCl.

M= 2.915 gr NaCl.

Luego de efectuar los anteriores cálculos se procedió a diluir 2.915 gr de NaCl en agua destilada hasta llegar a 25 ml de solución.

Después se tomó un trozo de material biológico, en este caso se utilizó musa paradisiaca conocida comúnmente como banana. Luego se tomó un bisturí estéril y se corto en pequeños fragmentos el trozo de banana. Posteriormente se procedió a depositar los pequeños fragmentos en un mortero. Luego se agregaron 20 ml de agua destilada, se tomó el mazo y se procedió a macerar hasta disolver completamente el material biológico.

Luego se esperaron aproximadamente 10 minutos hasta que el macerado se precipitara.

Después que esto sucedió se tomo un beaker limpio y un trozo de gasa doble de aproximadamente de 10 x 10 cm. Se colocó la gasa en el beaker

y se procedió a filtrar el macerado, esto se hizo varias veces hasta que el precipitado quedó libre de partículas solidas.

Luego se determinó el volumen del sobrenadante con una probeta. Y se le adicionó la misma cantidad de solución de NaCl 2M. Posteriormente se agregó aproximadamente entre 1 ml y 2 ml de champú se homogenizó esta mezcla y se esperaron 10 minutos.

Después se transfirió un poco de esta mezcla a un tubo de ensayo, luego este tubo se introdujo en un tubo de eppendorf y se procedió a centrifugar esta mezcla a 12000 rpm durante 5 minutos. Después de centrifugar se tomó una pipeta Pasteur y se tomó el sobrenadante y se transfirió a otro tubo de ensayo.

Posteriormente se tomó el etanol frio y se aplicó al sobrenadante. Esto se efectuó con el tubo de ensayo con un grado de inclinación aproximadamente de 35° grados, se tuvo especial cuidado al aplicar el etanol este se tuvo que aplicar a las paredes del tubo de ensayo y no directamente.

Luego de realizar este proceso se pudo observar entre la interfase del etanol y el sobrenadante los ácidos nucleícos formando una capa de color blanco.

ANÁLISIS Y RESULTADOS

Cada una de las sustancias y materiales utilizados en el proceso de extracción de ADN nos permitió que esta práctica se desarrollara de la manera adecuada obteniendo el resultado esperado, El cual fue el siguiente: se pudo observar claramente las cadenas de ADN del banano en un tubo de ensayo, en el cual el ADN se encontraba suspendido en entre el alcohol y el precipitado; para realizar correctamente el procedimiento de extracción de ADN se tuvo que macerar la porción de banano lo cual sirvió para romper las membranas celulares lo que libero los núcleos y permitió una absorción más eficiente de las soluciones, por último se Libero el ADN contenido en el núcleo de las células el cual se llevo a cabo en distintas etapas: Romper la membrana para acceder al núcleo de la célula, romper la membrana nuclear para dejar libre el ADN, Se libero el ADN de proteínas asociadas (histonas), Se protegió el ADN de enzimas

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