Extraccion De Adn

1. INTRODUCCIÓN:

El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, biólogo suizo, en los núcleos de las células del pus obtenidas de los vendajes quirúrgicos desechados y en el esperma del salmón. Él llamó a la sustancia nucleína, aunque no fue reconocida hasta 1943 gracias al experimento realizado por Oswald Avery

La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucleótidos. La estructura de doble hélice del ADN fue descubierta en 1953 por James Watson y Francis Crick. Una larga hebra de ácido nucleico está enrollada alrededor de otra hebra formando un par entrelazado. Dicha hélice mide 3,4 nm de paso de rosca y 2,37 nm de diámetro, y está formada, en cada vuelta, por 10,4 pares de nucleótidos enfrentados entre sí por sus bases nitrogenadas.

La extracción de DNA a partir de muestras de distinta como: ADN de tejidos de mamífero (riñón, pulmón, corazón y hígado) y sangre constituye la etapa previa de todo análisis genético. Obtener DNA relativamente puro y futuramente amplificable es fundamental para los posteriores usos a los que será destinado. En general; los métodos de extracción de DNA tienen una serie de pasos básicos, que se cumplen independientemente del origen de la muestra. Estos son, a saber: la ruptura celular (la ruptura de la bicapa lipídica de las membranas celulares por tratamiento con detergentes, agentes quelantes que obtienen cationes estabilizantes de la membrana), eliminación de las proteínas (que constituyen los principales contaminantes del extracto), concentración del DNA (por precipitación con alcoholes), lavado (para eliminar restos de reactivos y solventes que puedan inhibir la polimerasa) y resuspensión. (1, 2) Para muestras de sangre en particular, distintos protocolos han sido descriptos y publicados, pudiendo diferenciarse básicamente dos alternativas metodológicas, las cuales difieren en la etapa de la purificación de las proteínas del extracto (3, 4). Así podemos encontrar métodos que aprovechan las propiedades desnaturalizantes que tienen ciertos solventes orgánicos. (1, 3), y a aquellos fundamentados en el conocido cambio de solubilidad que experimentan las proteínas cuando son sometidas a modificaciones en la concentración salina del medio (1, 5). Así, en presencia de bajas concentraciones de sales, se verifica un ligero aumento en la solubilidad de las proteínas por aumento de la fuerza iónica del medio respecto de soluciones acuosas. Por el otro lado, en presencia de altas concentraciones de sales, la solubilidad de las proteínas disminuye y terminan por precipita (6). Este es el fundamento fisicoquímico de la precipitación de proteínas por salado. (7).

Para la extracción de los ADN hemos utilizado el protocolo sugerido por el profesor Leopoldo Arrieta, para la extracción de ADN de un tejido de mamífero básicamente con un aumento de proteinasa K y de ARNasa, mantenido similitud con la extracción de ADN de sangre el resto del protocolo, hemos requerido cantidades mínimas de tejido, para no obtener una calidad baja requerida para los experimentos a realizar, recurrimos al uso de los paquetes comerciales mencionados, ya que a pesar de ser muy caros y permitir realizar estudios extensivos, permiten obtener ADN de buena calidad. Respecto a los costos de dichos paquetes, basta decir que siempre es más barato no tener que repetir todo el experimento y que es posible obtener buenas promociones si se consiguen los componentes a granel y en grandes volúmenes, y no en paquete.

Es fundamental la preparación del material, de donde será extraído el AND para la una buena calidad, también las diluciones de los reactivos que se utilizan en determinada concentración, el material en buen estado y esterilizado tener encuentra que cuando es manipulado sea con las condiciones respectivas de seguridad (guates, tapabocas, bata, etc.) como lo considera el protocolo.

2. OBJETIVOS: Hacer un cuadro comparativo de las diferencias y semejanzas entre los protocolos de extracción de sangre total y la extracción de DNA de tejidos de mamíferos.

3. PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN: ¿Cuál es la principal diferencia (en el DNA extraído) entre los dos protocolos?

4. HIPÓTESIS: la enzima proteinasa k permite la digestión de los enlaces peptídicos, para llegar a la extracción de ADN del tejido de mamífero a diferencia de los de más protocolo que no utiliza esta clase de enzima.

5. DISEÑO METODOLÓGICO: Se basa en comparar reactivo y materiales en dos protocolos para la extracción de ADN, de muestras de sangre y un tejido (riñón,

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