Guía Medicina Molecular

Técnica Molecular

Función

Características

Aplicaciones

Para      ADN

PCR estándar

Método enzimático de amplificación de secuencias específicas de ADN para obtener millones de copias mediante la ADN polimerasa.

Específica, rápida, sensible y versátil.

Amplificación de genes,

Modificación de fragmentos de ADN, genotipificacion, detección de mutaciones, marcadores genéticos, expresión de genes.

PCR en tiempo real/cuantitativa

PC estándar donde se utilizan

tinciones o sondas con fluoróforos

para la detección de los fragmentos

amplificados

PC estándar donde se utilizan

tinciones o sondas con fluoróforos

para la detección de los fragmentos

amplificados

Es la más rápida y sensible, Técnica cuantitativa

Cuantificación de expresión génica, detección de agentes infecciosos y polimorfismos, diagnostico tumoral

Secuenciación

Conocimiento de la secuencia de bases nitrogenadas de un fragmento de ADN mediante un método químico o enzimático

Permite el conocimiento de la estructura más básica de un nucleótido o gen

Entender la estructura detectar mutaciones y mecanismos

fisiopatológicos generados

por inferencia en la secuencia

y homología de genes

Southern blot

Estrategia estándar para analizar ADN previamente digerido con enzimas de

restricción. Esta técnica se utiliza para determinar la presencia de un gen o fragmentos del

ADN específicos en una mezcla de ácidos nucleicos previamente extraídos.

De gran utilidad para identificar genes asociados con enfermedades de transmisión Genética, e identificar mutaciones, como rearreglos,

deleciones y dosis génica en caso de portadores.

También se utiliza para detectar polimorfismos en los fragmentos de restricción de diversos genes.

Para

ARN

RT-PCR

íntesis de cADN a partir de ARN

mediante transcripción reversa,

seguido de una RP

Síntesis de cADN a partir de ARN

mediante transcripción reversa,

seguido de una PCR

Usa la enzima ARN retrotranscriptasa

Técnica semicuantitativa

Expresión de genes.

Detección de virus ARN

Cuantificación de expresión génica

Northern

 blot

Se utiliza ARN en lugar de ADN. A diferencia del Southern blot, con esta técnica no se utilizan enzimas de restricción. Sin embargo, prácticamente comparten todos los demás pasos, como son la electroforesis, la desnaturalización,

la transferencia y la hibridación con una sonda

Es la técnica más sensible para detectar niveles de expresión de ARNm

Útil para el estudio de los productos de la transcripción génica

(ARNm) y de su regulación, ya que se pueden estudiar las potenciales variaciones en la

abundancia de especies del ARN en diferentes condiciones experimentales o comparar

condiciones clínicas normales o patológicas.

Hibridación

Proceso por el cual se combinan dos cadenas de ácidos nucleicos antiparalelas Se separa una cadena de ADN mediante temperatura o sustancias

químicas para que sean unidas a “Sondas” que se encuentran en una superficie. La

hibridación se puede dar de DNA-DNA y DNA-RNA. Cuando una sonda “se pega” en la ADN

muestra indica que está presente la secuencia que poseía la Sonda.

Se pueden formar hibridaciones inestables y estables, las inestables pueden ser disueltas

muy fácilmente.

Sirve para la detección de VPH

Para

Proteínas

Para

Proteínas

Western Blot

se basa en la reacción antígeno-anticuerpo pero utilizando

proteínas. Se utiliza una muestra de proteínas, esta mezcla puede incluir todas las proteínas asociadas con un tipo particular de tejido o célula. Las transferencias

Western también se pueden usar para evaluar el tamaño de una proteína de interés y

para medir la cantidad de expresión de proteína.

Para proteínas especificas

La primera reacción con un anticuerpo secundario que llevará elmarcador para emitir la fluorescencia.

Examinar cambios en niveles proteicos

Inmunohistoquímica

Es una prueba que utiliza la reacción de antígeno-anticuerpo pero con la muestra de

un tejido, se utilizan anticuerpos primarios y secundarios.

Técnica semicuantitativa

La inmunohistoquímica es

muy importante para la detección de cáncer de mama, es una prueba de tamizaje que

te indica la presencia de dicha enfermedad.

Elisa

En este tipo de técnica, puede haber la presencia de anticuerpos primarios, secundarios o hasta terciarios con el fin de “atrapar” y “estabilizar” más al antígeno buscado junto con el anticuerpo dado por el organismo. Los anticuerpos llevan un fluoróforo que una vez que la

reacción Ag-Ac sea establecida, emitirá una fluorescencia.

Sencilla, rápida y economica

Técnica de inmunoensayo (basada en reacción antígeno anticuerpo) utilizada como la

prueba de tamiz más usada para ver VIH, Dengue y Sika.

Inmunoensayos

Se utiliza la reacción antígeno-anticuerpo para la detección de diferentes

anormalidades. Se puede generar cualquier tipo de anticuerpo para cualquier tipo de

antígeno.

Normal

Micro arreglos

Es una técnica en donde se colocan muchas sondas para algo específico en una superficie pequeña (un microarreglo).

Prueba bastante útil y que

funciona como tamizaje.

Es costosa

 Son bastante utilizadas para detectar la presencia de varias cosas a la vez. Sirve para la detección de VPH y hepatitis C y B

Electroforesis

Técnica que permite la separación de moléculas por carga y tamaño.

Técnica sencilla

Comparación de muestras biológicas distintas

Hibridación

Proceso por el cual se combinan dos cadenas de ácidos nucleicos antiparalelas Se separa una cadena de ADN mediante temperatura o sustancias

químicas para que sean unidas a “Sondas” que se encuentran en una superficie. La

hibridación se puede dar de DNA-DNA y DNA-RNA. Cuando una sonda “se pega” en la ADN muestra indica que está presente la secuencia que poseía la Sonda.

Se pueden formar hibridaciones inestables y estables, las inestables pueden ser disueltas

muy fácilmente.

Sirve para la detección de VPH

Captura de híbridos

Se capturan o detectan  los híbridos al añadirles un anticuerpo marcado

Más simple que PCR

Menos sensible

Más barata

Sirve para detección de VPH

Fish

Marcaje de cromosomas al hibridarse con sondas marcadas con sondas marcadas con fluoroforos , al hibridarse emiten fluorescencia y permiten la visualización, distinción y estudio de los cromosomas

Detectan síndromes, anomalías cromosómicas

Detección de HER2/NEO, útil para un tratamiento para cáncer de mama.

CGH

Comparar 2 muestras de ADN genómico derivado de dos organismos diferentes

donde se sospecha que tienen diferencia en la ganancia o pérdida de cromosomas

completos o regiones subcrosomiales.

Tiene una mayor resolución, más que técnicas como FISH.

Translocaciones, inversiones, cromosomas anillos no son detectados porque estos no

afectan el número de copias.

Permite visualizar los 46 cromosomas en una sola prueba, la detección de deleciones y

duplicaciones,