Guía Medicina Molecular
Enviado por Giselle Arceo • 12 de Febrero de 2020 • Apuntes • 902 Palabras (4 Páginas) • 141 Visitas
Técnica Molecular | Función | Características | Aplicaciones | |
Para ADN | PCR estándar | Método enzimático de amplificación de secuencias específicas de ADN para obtener millones de copias mediante la ADN polimerasa. | Específica, rápida, sensible y versátil. | Amplificación de genes, Modificación de fragmentos de ADN, genotipificacion, detección de mutaciones, marcadores genéticos, expresión de genes. |
PCR en tiempo real/cuantitativa | PC estándar donde se utilizan tinciones o sondas con fluoróforos para la detección de los fragmentos amplificados PC estándar donde se utilizan tinciones o sondas con fluoróforos para la detección de los fragmentos amplificados | Es la más rápida y sensible, Técnica cuantitativa | Cuantificación de expresión génica, detección de agentes infecciosos y polimorfismos, diagnostico tumoral | |
Secuenciación | Conocimiento de la secuencia de bases nitrogenadas de un fragmento de ADN mediante un método químico o enzimático | Permite el conocimiento de la estructura más básica de un nucleótido o gen | Entender la estructura detectar mutaciones y mecanismos fisiopatológicos generados por inferencia en la secuencia y homología de genes | |
Southern blot | Estrategia estándar para analizar ADN previamente digerido con enzimas de restricción. Esta técnica se utiliza para determinar la presencia de un gen o fragmentos del ADN específicos en una mezcla de ácidos nucleicos previamente extraídos. | De gran utilidad para identificar genes asociados con enfermedades de transmisión Genética, e identificar mutaciones, como rearreglos, deleciones y dosis génica en caso de portadores. También se utiliza para detectar polimorfismos en los fragmentos de restricción de diversos genes. | ||
Para ARN | RT-PCR | íntesis de cADN a partir de ARN mediante transcripción reversa, seguido de una RP Síntesis de cADN a partir de ARN mediante transcripción reversa, seguido de una PCR | Usa la enzima ARN retrotranscriptasa Técnica semicuantitativa | Expresión de genes. Detección de virus ARN Cuantificación de expresión génica |
Northern blot | Se utiliza ARN en lugar de ADN. A diferencia del Southern blot, con esta técnica no se utilizan enzimas de restricción. Sin embargo, prácticamente comparten todos los demás pasos, como son la electroforesis, la desnaturalización, la transferencia y la hibridación con una sonda | Es la técnica más sensible para detectar niveles de expresión de ARNm
| Útil para el estudio de los productos de la transcripción génica (ARNm) y de su regulación, ya que se pueden estudiar las potenciales variaciones en la abundancia de especies del ARN en diferentes condiciones experimentales o comparar condiciones clínicas normales o patológicas. | |
Hibridación | Proceso por el cual se combinan dos cadenas de ácidos nucleicos antiparalelas Se separa una cadena de ADN mediante temperatura o sustancias químicas para que sean unidas a “Sondas” que se encuentran en una superficie. La hibridación se puede dar de DNA-DNA y DNA-RNA. Cuando una sonda “se pega” en la ADN muestra indica que está presente la secuencia que poseía la Sonda. | Se pueden formar hibridaciones inestables y estables, las inestables pueden ser disueltas muy fácilmente. | Sirve para la detección de VPH | |
Para Proteínas Para Proteínas | Western Blot | se basa en la reacción antígeno-anticuerpo pero utilizando proteínas. Se utiliza una muestra de proteínas, esta mezcla puede incluir todas las proteínas asociadas con un tipo particular de tejido o célula. Las transferencias Western también se pueden usar para evaluar el tamaño de una proteína de interés y para medir la cantidad de expresión de proteína. | Para proteínas especificas La primera reacción con un anticuerpo secundario que llevará elmarcador para emitir la fluorescencia. | Examinar cambios en niveles proteicos |
Inmunohistoquímica | Es una prueba que utiliza la reacción de antígeno-anticuerpo pero con la muestra de un tejido, se utilizan anticuerpos primarios y secundarios. | Técnica semicuantitativa | La inmunohistoquímica es muy importante para la detección de cáncer de mama, es una prueba de tamizaje que te indica la presencia de dicha enfermedad. | |
Elisa | En este tipo de técnica, puede haber la presencia de anticuerpos primarios, secundarios o hasta terciarios con el fin de “atrapar” y “estabilizar” más al antígeno buscado junto con el anticuerpo dado por el organismo. Los anticuerpos llevan un fluoróforo que una vez que la reacción Ag-Ac sea establecida, emitirá una fluorescencia. | Sencilla, rápida y economica | Técnica de inmunoensayo (basada en reacción antígeno anticuerpo) utilizada como la prueba de tamiz más usada para ver VIH, Dengue y Sika. | |
Inmunoensayos | Se utiliza la reacción antígeno-anticuerpo para la detección de diferentes anormalidades. Se puede generar cualquier tipo de anticuerpo para cualquier tipo de antígeno. | |||
Normal | Micro arreglos | Es una técnica en donde se colocan muchas sondas para algo específico en una superficie pequeña (un microarreglo). | Prueba bastante útil y que funciona como tamizaje. Es costosa | Son bastante utilizadas para detectar la presencia de varias cosas a la vez. Sirve para la detección de VPH y hepatitis C y B |
Electroforesis | Técnica que permite la separación de moléculas por carga y tamaño. | Técnica sencilla | Comparación de muestras biológicas distintas | |
Hibridación | Proceso por el cual se combinan dos cadenas de ácidos nucleicos antiparalelas Se separa una cadena de ADN mediante temperatura o sustancias químicas para que sean unidas a “Sondas” que se encuentran en una superficie. La hibridación se puede dar de DNA-DNA y DNA-RNA. Cuando una sonda “se pega” en la ADN muestra indica que está presente la secuencia que poseía la Sonda. | Se pueden formar hibridaciones inestables y estables, las inestables pueden ser disueltas muy fácilmente. | Sirve para la detección de VPH | |
Captura de híbridos | Se capturan o detectan los híbridos al añadirles un anticuerpo marcado | Más simple que PCR Menos sensible Más barata | Sirve para detección de VPH | |
Fish | Marcaje de cromosomas al hibridarse con sondas marcadas con sondas marcadas con fluoroforos , al hibridarse emiten fluorescencia y permiten la visualización, distinción y estudio de los cromosomas | Detectan síndromes, anomalías cromosómicas Detección de HER2/NEO, útil para un tratamiento para cáncer de mama. | ||
CGH | Comparar 2 muestras de ADN genómico derivado de dos organismos diferentes donde se sospecha que tienen diferencia en la ganancia o pérdida de cromosomas completos o regiones subcrosomiales. | Tiene una mayor resolución, más que técnicas como FISH. | Translocaciones, inversiones, cromosomas anillos no son detectados porque estos no afectan el número de copias. Permite visualizar los 46 cromosomas en una sola prueba, la detección de deleciones y duplicaciones, |
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