Guía de exposición de biorreacción

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Dentro de resultados y discusión

Inmovilización de invertasa en quitosano

• Aumento de la concentración de glutaraldehído a 1.5% mostro un aumento de la actividad de la invertasa, sin embargo, mayor a eso disminuye la actividad de la enzima[pic 1]
• Invertasa máxima por g de perlas de quitosano es de 52U por proteína de 0,43 mg/g de perlas
• A concentraciones de aldehído más altas, se involucra el entrecruzamiento de los grupos amino del quitosano y también más grupos aldehídicos libres están disponibles para reaccionar con la enzima e inmovilizarla 

• Debido a que el glutaraldehído reacciona de manera no especifica, tiene uniones de puntos múltiples lo cual puede causar cambios conformacionales que pueden conducir a la pérdida de la actividad enzimática durante la inmovilización, sin embargo, en condiciones neutras se puede unir (covalentemente) fácilmente a los grupos amino de soporte para que reaccionen con nucleófilos de las proteínas
• Este entrecruzamiento otorga resistencia mecánica a las perlas, estabilidad química y mayor eficiencia de inmovilización.
• Además, no se observó lixiviación de invertasa del soporte. quitosano reticulado sea un buen soporte para la inmovilización de la invertasa.

Nota de lo que dijo la profa: Si se aumenta el glutaraldehído sea muchos enlaces que le dará como “rigidez” haciendo que se pierda la actividad de la enzima

• En este aspecto si hacemos la comparación En la práctica se utiliza la inmovilización por atrapamiento en gel, uso de perlas de agar- agar, en este caso la enzima no sufre ninguna alteración en su estructura, pero se debe hace la comprobación de que la naturaleza química del proceso no altera los grupos reactivos de la proteína

• El articulo hizo uso de inmovilización por enlace covalente.

Lo de gris ya no lo dije, pero por si te sirve

Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad de invertasa (enzima)

• Con la inmovilización se reduce (atenúa)la afinidad del sustrato y la enzima, esto se puede ver ya que llega hasta la concentración de 0,5 mol la mayor actividad[pic 2]
• Esto es por los cambios conformacionales que sufrió la invertasa y por tanto la limita o interfiere en la difusión del sustrato hacia la enzima dentro de la matriz sólida, debido a esto requirió una concentración más alta de sacarosa.
• Se puede observar que un aumento mayor al 0.5mol de sacarosa provocara la disminución o que ya no haya activad de la invertasa
• Esto se puede observar con los valor de km que presentan entre las enzimas inmovilizadas en un (0,44 mol dm-3 ) y las enzimas libres(0,042 mol dm-3)

• Por tanto, se observa como El valor Km de la invertasa inmovilizada fue 10 veces mayor que el de la invertasa libre.
• Inmovilizadas mostraron una menor inhibición de concentración de sacarosa en comparación con la libre, posiblemente por a la atenuación de la afinidad del sustrato con las enzimas inmovilizadas por los cambios conformacionales y el recubrimiento de la perla.
• La constante de inhibición es de 3,41 mol dm-3 y 1,2 mol dm-3, respectivamente, para enzimas libres e inmovilizadas. Esto puede proporcionar una ventaja adicional para la invertasa inmovilizada y hacerla más atractiva para su aplicación

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