INVESTIGACIONES PRELIMINARES REALIZADAS EN TORNO AL ESTABLECIMIENTO In Vitro DE ESPECIES CHILENAS DE Rhodophiala

Chile posee una gran diversidad de especies bulbosas endémicas, constituyendo un pool genético que merece ser rescatado y estudiado. Entre estas especies destacan las pertenecientes a la Familia Amaryllidaceae, tales como Rhodophiala bagnoldii, Rhodophiala montana, Rhodophiala splendens y Rhodophiala rhodolirion, las cuales se distribuyen desde la III a la X región de nuestro país. Son plantas geófitas, que producen hermosas flores de llamativos colores. Naturalmente su reproducción es por semillas, pero también presenta órganos de almacenamiento que les permiten permanecer en estado de dormancia o receso, cuando las condiciones de humedad o temperatura no son las adecuadas. Las investigaciones realizadas en torno a esta especie han sido principalmente en torno a estudios citológicos y de multiplicación (Palma-Rojas, 1999, Muñoz, 2001, Basoalto, 2001). Al igual que otras Amaryllidaceas, la propagación a partir de bulbos en forma natural no ha sido un método efectivo, ya que produce escasos bulbillos hijos, con lo cual se han investigado otras alternativas tales como, el seccionamiento y obtención de escamas gemelas, el corte en cruz y el vaciado (Peñailillo et al., 2000). La aplicación de técnicas biotecnológicas, mediante la micropropagación, ha sido la mas utilizada en la mayoría de las geófitas que se desarrollan comercialmente, como es el caso de Hippeastrum. En el caso de Rhodophiala, esta técnica ha sido aplicada en R. montana, R. rhodolirion, R. splendens y R. bagnoldii (Basoalto, 2001; Ferrando, 2002; Seemann et al 2003). No obstante lo anterior, se espera que los conocimientos en la micropropagación de otras geofitas sean aplicados exitosamente a las cuatro especies en estudio, de tal forma de elaborar un protocolo para el establecimiento y cultivo in vitro, ya sea mediante la incorporación de material vegetativo o por germinación de semillas.

Material y Métodos

Material Vegetal: los ensayos se realizaron con escamas de bulbos y semillas de Rhodophiala bagnoldii y Rhodophiala montana y bulbos in vitro de Rhodophiala rhodolirion. El establecimiento in vitro se realizó mediante el lavado, desinfección y obtención de escamas gemelas mediante técnicas habituales.

Establecimientos de ensayos: Se llevaron a cabo los siguientes ensayos:

• Ensayo1: Escamas gemelas de R. montana fueron cultivadas en medio basal MS adicionado con 6% de sacarosa, Acido Naftalen Acético (0; 0,1; 0,2; 0,4 y 0,8 mg/L) en combinación con las citoquininas 2-isopentil adenina, Tidiazurón y Kinetina (0; 0,25; 0,5 1,0 y 2,0 mg/L) y 6-benzilaminopurina (0; 0,5; 1,0 2,0 y 4,0 mg/L).

• Ensayo 2: Escamas de R. montana fueron cultivadas en medio MS con 0,1 mg/L ANA y 1,0 mg/L de 2iP, adicionado con cinco tipos de carbohidratos (sacarosa, glucosa, fructosa, sacarosa/glucosa y sacarosa/fructosa) en concentraciones de 2%, 6% y 9%.

• Ensayo 3: Escamas de R. montana fueron cultivadas en medio basal MS con cinco concentraciones de las macrosales (150%, 125%, 100%, 75% y 50%) en combinación con tres concentraciones de sacarosa (3%, 6% y 9%).

• Ensayo 4: Escamas de R. bagnoldi y R. montana fueron cultivadas en medios MS (100% y 75%) con/sin carbón activado en combinación con o sin preremojo en antioxidantes (ácido cítrico/ácido ascórbico (AC/AA, 0,25 g/L) y Polivinil Pirrolidona 40 (PVP, 1 g/L).

• Ensayo 5: Bulbillos in vitro de Rhodophiala rhodolirion, fueron cultivados en medios con reducción de macrosales 50% y normal, con y sin reguladores de crecimiento (ANA/BAP).

• Ensayo 6: Incorporación de semillas de R. montana y R. bagnoldii, desinfectadas y sembradas en un medio MS reducido al 50%, evaluándose el porcentaje de germinación a los 42-70 días.

Los datos se analizaron estadísticamente, por medio de un análisis de varianza y la Prueba de Tukey para determinar las diferencias de las medias, con un nivel de probabilidad

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