Informe Lab

MATERIALES, METODOS Y REACTIVOS

 Cultivo de microorganismos

 Kumis

 Azul de metileno

 Solución colorante de cristal violeta

 Colorante de GRAM

 Violeta de genciana

 Toallas de papel secante

 Microscopio

 Aceite de inmersión

 Beaker y pipeta

 Mechero y agua destilada

 Goteros y etanol al 95%

 Portaobjetos

PROCEDIMIENTO

PARTE A

Preparación de un frotis

Comprendió las siguientes etapas:

1. Extendido del material en un portaobjetos transparente

2. Secado

3. Fijación

Se verificó que en la mesa se encontraran los siguientes materiales: Caja Petri, asa microbiológica, beaker con agua destilada, portaobjetos limpios, muestra biológica.

1. Extendido. Disolver la muestra en una caja Petri con un poco de agua destilada; mezclarla con el asa.

1.1 Se preparó un portaobjetos limpio

1.2 Se introdujo el asa en un beaker con agua destilada (para limpiarla) y luego flamearlo hasta rojo vivo; para introducirla de nuevo en el agua destilada (para enfriarla)

1.3 Se tomó una muestra con el asa (si es líquida) y colocarla sobre un portaobjetos limpio y zigzagueando

1.4 Si la muestra proviene de un cultivo en medio sólido, colocar primero una gota de agua sobre el portaobjetos, tomar la muestra con el asa, tocar la gota, quemar el asa y luego enfriada, mezclar bien con el agua.

2. Secar al aire. Puede acelerarse el secado, manteniendo la lámina encima de la llama del mechero a 15 cm o más distancia. (Es conveniente sostener el portaobjetos con la mano, ya que si la mano no soporta el calor de la llama, las células pueden deformarse y teñirse defectuosamente.

3. Fijar. Con el frotis seco, se pasó el porta tres veces por la llama del mechero para fijar.

PARTE B

TECNICA PARA LA COLORACION DE BACTERIAS

1. Coloración Simple:

1.1 Se preparó un frotis según la técnica habitual antes descrita

1.2 Se colocó el portaobjetos sobre un soporte para tinciones

1.3 Se cubrió la preparación con 2 o 3 gotas de solución de azul metileno y dejar 1 min (o cristal violeta y dejar 30 seg)

1.4 Se lavó con agua

1.5 Se secó con papel filtro o encima del mechero

1.6 Se observó a través del microscopio con lente de inmersión para así determinar las formas, disposición y relación de los tamaños de las distintas bacterias.

2. Coloración de GRAM (Técnica de Hucker):

2.1 Se preparó un frotis según la técnica antes descrita

2.2 Se colocó el portaobjetos sobre un soporte para tinciones

2.3 Se cubrió con solución de cristal violeta y se dejó actuar 1 min

2.4 Se lavó suavemente con agua de la pluma o grifo

2.5 Se cubrió con Lugol y se dejó actuar 1 min

2.6 Se repitió el procedimiento 2.4

2.7 Se cubrió con etanol 95% (decolorante de Gram) y se dejó 30 seg mientras se movía suavemente la lámina. Se siguió lavando hasta que este no arrastre más colorante.

2.8 Se fue realizando el lavado con agua

2.9 Se cubrió con solución de safranina o Fuscina de Gram y dejar 1 min

2.10 Se lavó y secó. Se observó con objetivo de inmersión y se determinó la forma, disposición y relación de tamaños de las distintas bacterias.

3. Relación entre células procariotas y eucariotas:

3.1 Se tomó un palillo de dientes y se realizó un frotis sobre el epitelio interno de la mejilla y se colocó sobre un portaobjetos zigzagueando sobre él y teñir con azul de metileno.

3.2 Se procedió a tomar un poco de Kumis

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