Inoculo protocolo

Para la realización del inoculo y el pre inoculo es necesario preparar en total 100 mL de medio. En un tubo de ensayo de los grandes adicional 8mL de medio, mientras que en un erlenmeyer de 150 mL adicionar el resto del medio. Colocar a autóclavar. Para el caso del tubo de ensayo este debe estar con la tapa medio puesta, antes de sacarlo del autoclave, se debe cerrar por completo la tapa para que no se vaya a contaminar el medio. El erlenmeyer debe estar tapado con aluminio. Las puntas se deben colocar en la caja de las azules y cuando se coloca en el autoclave se deja sin el seguro, cuando se vaya a sacar del autoclave se tapa bien. Los tapones que no se vayan a usar se deben dejar ende el horno, las puntas se dejan en la cabina al igual que el erlenmeyer.

Limpiar con etanol el meson de la cabina, la incubadora y en especial las manos antes y después de colocarse los guantes.

Asegurarse que la incubadora ya se encuentra a las condiciones requeridas

Llevar a la cabina las puntas, el tubo de ensayo y el microorganismo, en ningún momento abrir ni un poco estos en especial el tubo donde está el microorganismo.

Con cuidado destapar el tubo de ensayo sin retirar por completo la tapa, lo mas rápido posible destapar un poco el tubo donde esta el microorganismo y adicional a ojo aproximadamente 0,4 g del microorganismo, más o menos hasta que en el fondo del tubo de ensayo se vea una pequeña cantidad que se debe tener muy presente. Tapar rápidamente todo y asegurarse de que el microorganismo quedo super bien cerrado, llevar el tubo de ensayo a la incubadora y medio destapar pero no aflojar del todo. Dejar fermentar durante 24 horas. Limpiar todo con etanol, así no se haya usado.

Pasado el tiempo de fermentación revisar si la biomasa en el tubo ha aumentado, si no ha aumentado dejar otras 24 horas. Si ha aumentado limpiar y preparar todo para sembrar en el Erlenmeyer pequeño. En este caso se adicional todo el contenido del tubo de ensayo al erlenmeyer. Dejar fermentar otras 24 horas.

 Durante este tiempo preparar los medios de cultivo por duplicado considerando un volumen total de 200 mL y que 15 mL son del inoculo. Por lo tanto el volumen a preparar para cada caso es de 185 mL. A partir de la fuente de glucosa a emplear en cada caso, preparar una solución de 185 ml con la concentración de glucosa requerida (30 g/L). Adicionar los demás nutrientes y poner a autoclavar en los erlenmeyer en los que se vaya a realizar la fermentación. Recordar que para autoclavar deben estar tapados con papel aluminio. En este caso si se desea poner a autoclavar una probeta pequeña (que sirva para medir 15 mL) con un poco de agua y tapada con aluminio.

Una vez este todo autoclavado llevar a la incubadora y proceder con el proceso de siembra. A cada medio adicionar 15 mL de medio. Estos se pueden medir con la probeta o dado el caso se puede hacer manual. Agitar bien el erlenmeyer, tomar la muestra cero y colocar el tapón. Cuando ya se halla sembrado en todos los medios llevar estos a la incubadora y realizar toma de muestra cada dos horas en un ependorf.  Estos deben haber sido colocados previamente 24 horas en el horno a 60°C y 15 min antes de que vayan a ser usados colocar en el desecador, los tubos que no se empleen en cada caso se deben regresar al horno.

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