LABORATORIO DE BIOQUIMICA II PRE-REPORTE 4 “FERMENTACION ALCOHOLICA.”

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CENTRO DE CIENCIAS BASICAS. DEPARTAMENTO DE QUIMICA.

LABORATORIO DE BIOQUIMICA II PRE-REPORTE 4 “FERMENTACION ALCOHOLICA.”

ALUMNA:

CLAUDIA ARELY MARTINEZ ORTEGA. LIC.  EN ANALISIS QUIMICO BIOLOGICOS.

SEM: 5    GRUPO: B

PROFESOR:

M.C.Q. Janette Cecilia Sánchez Arana.

AGUASCALIENTES, AGS. A 16 De Marzo  Del 2016.

PRE-REPORTE 4

“FERMENTACION ALCOHOLICA.”

OBJETIVO(s):

Conocer la biología de las levaduras como responsables de la fermentación alcohólica;

observar un proceso fermentativo; estudiar las reacciones de la fermentación alcohólica y comprobar la formación de etanol y CO3 como productos finales de la fermentación.

Diagrama de flujo.

Experimento 1: 1.- preparar 40 ml de una solución de glucosa al 3% (P/V) y el mismo volumen de una solución de maltosa al 3% (p/v) y colocar cada una en un matraz Erlenmeyer de 50 ml.

2.-separar  3ml  de  cada  solución  en  un tubo de ensaye. Estas muestras servirán para realizar la reacción de Fehling y comprobar su poder reductor.

3.-suwpender 0.8g de la cepa de panificación de Saccharomyces cerevisiae en el resto de la solución de glucosa y maltosa.

[pic 2]

Experimento 2: análisis de la fermentación  mediante  la prueba de Fehling.

1.-se  comprueba  que  al principio había glucosa y al final del proceso desparecer la glucosa y se produce etanol.

[pic 3]2.-Tomar el tubo de ensaye en el que se colocó la muestra de glucosa      o      maltosa      sin

levaduras.

3.-realizar la prueba de  Fehling en ambas pruebas.

4.-tomar 1ml de la muestra de fermentación centrifugada y realizar la  prueba  de  Fehling  añadiéndole

1ml de reactivo a y 1ml de reactivo b, y calentar en baño de agua hirviendo por 5-10 min.

Experimento 3: análisis de la producción de etanol.

1.-colocar en tres tubos de ensaye lo siguiente:1)2ml del sobrenadante de fermentación. (Problema);2)2ml de agua destilada (control negativo); y 3)2ml de agua destilada mas de

20 gotas de etanol. (Control positivo).

2.-añadir a cada tubo un cristal muy pequeño de dicromato potásico, y

2ml de ácido sulfúrico 0.1N.

3.-añada 5ml de solución de BaCl2

1 M que precipitara el CO2 absorbido por el álcali.

4.-añada 3 gotas de fenolftaleína que dará un color rosa-violeta y titule con HCl 0.2M hasta que desaparezca el color rosa (PH=8.3)

anotando la cantidad necesaria para

ello.

3.-calentar a baño maría durante 5min. Debe formarse un compuesto aromático caracteristicas, y se pone de manifiesto porque cambia de color amarillento a azul. Es una reacción que nos indica

que existe el etanol. Los controles negativos y positivos generan dar negativos y positivos la prueba respectivamente.

Experimento 4: análisis de la produccion de CO2 durante la fermentación.

1.-para determinar la cantidad de CO2 producido durante la fermentación, se analiza el NaOH 0.5 M que atrapo al CO2 durante el proceso fermentativo.

2.-extraiga una alícuota de 10 ml de dicho NaOH y colóquela en un matraz Erlenmeyer de 50

REACCIONES:

CO2+2NaOH [+NaOH en exceso]             Na2CO3+H2O    [+NaOH en exceso] Na2CO3 +BaCl2              BaCO3 + 2 NaCl

NaOH ene exceso + HCl               NaCl + H2O

Fenolftaleína (rosa-violeta a pH> 10) -------- fenolftaleína (incolora a pH<8.3).

PRACTICA 4

Reacciones químicas de la fermentación

Ecuacion general de fermentación alcoholica

[pic 4]

Berg, J (2008) Bioquímica. Barcelona, España: Editorial Reverté. 464 p.p

Reacción de la fermentación de glucosa con levadura

[pic 5]

Esta reacción es la misma para la maltosa, ya que son las mismas moléculas, solo que con diferente acomodo.

Martínez, R. et.al (2007) Química: un proyecto de American Chemical Society.

Barcelona, España: Editorial Reverté. 418 p.p

Rendimiento de los carbohidratos utilizados

Cualitativamente, podemos decir que el que dio mejor rendimiento fue la glucosa, ya que se observaba más sobrenadante que en la prueba con maltosa. Al igual con forme a os resultados obtenidos de la reacción para obtener la concentración de CO2 que desprendió la reacción, la glucosa fue la que obtuvo mejores resultados.

Imagen 2. En la prueba cualitativa de Fehling realizada a maltosa (tubo de en medio) dio una reacción positiva, ya que el reactivo de Fehling se utiliza para la identificación de azucares reductores.

[pic 6]

Función del dicromato de potasio en el análisis de producción de etanol

El dicromato de potasio se utilizó en la prueba de análisis de producción de etanol, ya  que funciona  como  un  oxidante  de  este.  Como  se  muestra  en  la imagen siguiente, en cada tubo se agregó un cristal pequeño de dicromato donde en el tercer tubo dio una prueba positiva, ya que contiene etanol, en el caso contrario, el tubo 2 contiene agua, por lo que es una prueba negativa. En el caso de la muestra problema de maltosa (tubo 1) no hubo fermentación de alcohol, por lo que la prueba es negativa.

[pic 7]

Resultados de titulación

Imagen 1. En la imagen se muestra el resultado de la titulación de carbonato de sodio, con ácido clorhídrico. Se gastaron 18.5 ml de ácido para que la reacción llegara a su punto óptimo.[pic 8]

A partir de las reacciones siguientes se puede obtener la concentración de CO2  que se obtuvo de la reacción de fermentación:

CO2 + 2 NaOH ⟶ Na2CO3 + H2O Na2CO3 + BaCl2 ⟶ BaCO3 + 2NaCl

NaOH + HCl ⟶ NaCl + H2O

En la última reacción se puede obtener el volumen de NaOH que no reaccionó con

el CO₂, por lo que:

Con la formula C1V1= C2V2 podemos obtener el volumen de NaOH

V1=  ?₂ ?₂

?₁

Sustituyendo los valores de la reacción:

V1=  ( 0. 2? ) (18 . 5 )

0.5?

= 7.4ml de NaOH

Los 7.4 ml de NaOH son los mililitros que no reaccionaron con el CO₂, por lo que se

tiene que realizar una diferencia de los mililitros iniciales de NaOH con los mililitros

obtenidos

ml que reaccionaron con CO₂= 12ml – 7.4 ml= 4.6ml

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