Laboratorio 4

Introducción

Las enzimas son biocatalizadores principalmente provenientes de proteínas globulares sintetizadas por las células para catalizar reacciones bioquímicas especificas (1), las enzimas permiten aumentar la velocidad de una reacción química en millones de veces para que esta ocurra de manera inmediata cuando el organismo lo necesite. Poseen propiedades muy específicas debido a que actúan para un sustrato en particular. Las enzimas poseen grupos ionizables como el carboxilo, amino (entre los más relevantes), los que a un pH determinado puede provocar alteraciones en la estructura provocando la desnaturalización y por ende la alteración de su actividad enzimática, también otro factor que puede resultar peligroso para la estructura de la enzima es la temperatura, ya que al ser alterada de manera repentina puede provocar la pérdida de estructura y por ende la desnaturalización de la enzima (2), aunque existe otros factores que pueden alterar la enzima estos son los más importantes, cuando una enzima sufre cambios en su estructura también se afecta su función y por supuesto afecta en su actividad catalítica.

Objetivos

- Analizar el efecto del pH sobre la enzima alfa amilasa salival

- Utilizar el reactivo de lugol

- Conocer el efecto que produce el reactivo lugol en la alfa amilasa salival

Procedimiento experimental

-En un vaso precipitado de 50 ml agregar NaCL 0,9%, luego realizar un enjuague bucal durante 30 segundos, posteriormente colocar en un embudo algodón y ponerlo adentro de un vaso precipitado, después del enjuague eliminar en contenido en el embudo y esperar que se filtre.

-Rotular 5 tubos de ensayo con números del 1 al 5 y agregar en una pipeta de 5 y 10 ml con propipeta las siguientes soluciones:

-Tubo 1: Agregar 2ml de pH 5, 2ml de almidón 1% p/v y 2 ml de la preparación enzimática (alfa amilasa salival)

-Tubo 2: Agregar 2ml de pH 7, 2ml de almidón 1% p/v y 2 ml de la preparación enzimática (alfa amilasa salival)

-Tubo 3: Agregar 2ml de pH 7, 2 ml de almidón 1% p/v y 2 ml de NaCL 0,9%

-Tubo 4: Agregar 2ml de pH 9, 2 ml de almidón 1% p/v y 2 ml de preparación enzimática (alfa amilasa salival)

-Tubo 5: Agregar 2 ml de pH 9, 2 ml de almidón 1% p/v y 2 ml de NaCL 0,9%

-Agitar la mezcla y colocar a baño termorregulador por 15 minutos a 37°C, transcurrido el tiempo agregar 3 gotitas de lugol y observar.

Resultados

En el procedimiento se observó que luego de mezclar las solución y colocarlas en baño termorregulador las muestras de los 5 tubos tenían diferentes manchas blancas dentro del precipitado, posteriormente después de agregar el lugol y se observó que algunos tubos 3 y 5 cambiaban de color azul-violeta/negro (ver anexos figura 1), también se observó que el tubo 1 a pesar de no cambiar de color tenia precipitado de color violeta en el fondo mientras que los tubos ,2 y 4 no mostraban ningún cambio en su coloración (ver anexos figura 2).

Discusión

-La enzima alfa amilasa salival es capaz de actuar sobre los almidones y sobre el glucógeno, rompiendo enlaces alfa 1-4 de tal forma que se separan de dos en dos los fragmentos de las moléculas polimerasa (3) esto provoca la hidrosis de moléculas complejas a moléculas simples. Es importante mencionar que la amilasa salival tiene una actividad enzimática

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