Laboratorio Actividad Proteica

UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS

ASIGNATURA BIOQUIMICA

PROFESOR DIANA MARTINEZ PACHON (Med), DIANA CAROLINA CLAVIJO, MSc, PhD (c).

PRACTICA

TITULO ACTIVIDAD DE ENZIMAS PROTEOLITICAS

PREINFORME

1. Qué factores influyen sobre la actividad catalítica de las enzimas?. Describir su efecto.

2. Indique cuales son los productos de hidrólisis obtenidos del siguiente polipéptido sometido a la acción de la papaína.

K – S – M – L – A – D – G – W – Y – I – C – K – E – N – V – R – Q – S – P

OBJETIVOS

• Reconocer la actividad de las enzimas proteolíticas mediante la prueba de coagulación.

• Distinguir algunos factores que afectan la actividad de las proteasas

MARCO TEÓRICO

las proteínas intacta y los péptidos de gran tamaño no pueden ser absorbidos directamente por la célula, por lo que para incorporarse a las rutas catabólicas deben experimentar hidrólisis completa hasta transformarse en aminoácidos y péptidos de menor tamaño que si son capaces de atravesar la membrana celular. Este proceso de degradación de proteínas se denomina proteólisis y se realiza mediante enzimas proteolíticas o proteasas.

La papaína que se extrae del látex de la papaya, la bromelina de la piña y la ficina del higo, son hidrolasas del grupo de las sulfidril endoproteasas. Estas enzimas hidrolizan los enlaces peptídicos de los aminoácidos básicos como Leucina y Glicina, así como sus esteres y amidas.

Su acción catalítica está relacionada con la presencia de grupos sulfidrilos (-SH) de la cisterna en el centro activo. Estos grupos químicos pueden ser inhibidos por agentes oxidantes como el peróxido de hidrógeno y por metales pesados como el mercurio. El efecto de estos inhibidores es el de convertir los grupos sulfidrilo en disulfuro inactivos; el proceso es reversible cuando se tratan con agentes reductores como el glutatión, tiosulfato, bisulfito y cianhidrico .

Estas proteasas se sintetizan en forma activa, pero en algunos casos pueden existir inhibidas, de tal manera que para conseguir su máxima actividad necesitan de agentes quelantes como el EDTA. Al igual que otras proteasas, estas enzimas son activas a pH entre 3 y 9. el valor de pH óptimo varia según el sustrato que va a hidrolizarse; la estabilidad de la papaína es óptima a pH 5 pero decae rápidamente a pH inferiores a 3 o superiores a 11. la temperatura óptima oscila entre 40 y 60 grados C.

Debido a su amplia especificidad y gran estabilidad la papaína se emplea en la industria de alimentos, en la producción de concentrados, en medicina para controlar problemas digestivos y en la industria para el tratamiento de textiles y cueros.

En la presente práctica se empleará la prueba de la coagulación de la leche para evidenciar la actividad proteolítica de la papaína. La capacidad de coagulación de la leche se fundamenta en que normalmente la caseína de la leche se encuentra en forma de micelas y la digestión con una proteasa separa un glicopéptido de la molécula de caseína desestabilizando la micela y causando la coagulación.

MATERIALES Y REACTIVOS

• 1 Gradilla

• 12 Tubos de Ensayo

• 1 Pipeta graduada de 1ml

• 1 Pipeta graduada

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