Laboratorio de Bioquímica - Práctica No. 1 Fotocolorimetría y curva de calibración

Laboratorio de Bioquímica - Práctica No. 1 Fotocolorimetría y curva de calibración

1. Espectro de absorción de la muestra problema

1.1 Reportar los datos obtenidos en la práctica de absorbancia de la respectiva muestra en la siguiente tabla.

Muestra: Gelatina (poner si es albúmina o gelatina)

1.2 Grafique los datos obtenidos anteriormente en una curva de absorbancia vs longitud de onda, la cual corresponde al espectro de absorción de la muestra problema obtenida mediante un tratamiento con el reactivo de Biuret.

[pic 1]

1.3 ¿Qué significado tiene la intensidad de la absorbancia en el espectro? Indique cual es la longitud de onda donde se observa la absorbancia con mayor intensidad, ¿Por qué es importante realizar las subsecuentes mediciones concernientes a la elaboración de la curva de calibración con esta longitud de onda?

La intensidad de la absorbancia está condicionada por la cantidad de las transiciones electrónicas que se realicen en las moléculas, debido a la cantidad específica de energía que hay en la longitud de onda expuesta, brindándole la energía a los electrones de las transiciones; La ley de Beer-Lambert afirma que La intensidad de la energía absorbida por una especie depende del número de moléculas que sufren la transición electrónica a la longitud de onda  seleccionada, y ese número de moléculas depende a su vez de la concentración de la especie y de la longitud de la celda que la contiene; para minimizar al máximo las desviaciones de ésta , se acostumbra preparar una curva de calibración, a partir de una serie de soluciones patrón, cuyas concentraciones sean próximas a las de las muestras problema. Tanto a las soluciones patrón como a las muestras problema se les mide la absorbancia; con los datos de las soluciones patrón se construye la curva de calibración (A vs. C). Las absorbancias de las muestras problema se llevan a la curva y se deducen de ahí sus concentraciones.

Se usa esa longitud de onda debido a que se encuentra en nuestro espectro visible y es posible la diferenciación de un color, como se trabaja a 540 nm la longitud de onda se observa una coloración violeta debido a que absorbe verde amarillo

2. Curva de calibración

2.1 Llenar la siguiente tabla con los datos obtenidos de la práctica.

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