Las cosas locas

TOMA DE MUESTRAS DE NEMATODOS

Los métodos de muestreo son variados y están directamente relacionados con los objetivos que se propongan cumplir. El muestreo puede incluir muestras tomadas en el hábitat de los hospederos (muestras de suelo, corteza de árboles, galerías de insectos, etc), o bien los hospederos (insectos, por ejemplo) pueden servir como unidades de muestreo.

a) Muestreo de suelo

Cada muestra de suelo puede consistir en 3 submuestras por los menos. De acuerdo a los objetivos a perseguir estas submuestras pueden ser combianadas o consideradas por separado. Cada submuestra, o muestra total debe ser colocada en bolsa de plástico y mantenidas en a 8-15°C durante su procesamiento.

Recordar que es indispensable lavar la herramienta empleada, pala, corer, etc, entre cada muestra tomada.

Como mínimo la siguiente información debe ser registrada:

- Fecha

-Vegetación asociada

-Hábitat

-Elevacion
-Lugar del muestreo (con coordenadas de GPS)

-Temperatura

[pic 1]

Fig. Muestreo de suelo para nematodos entomopatogénicos

b) Muestreo de insectos

Los insectos terrestres subterráneos, o que se encuentren presentes en materia orgánica en descomposición, estiércol o vegetación pueden ser colectados mediante técnicas de flotación, centrifugación-sedimentación o embudo de Berlese, o una combinación de varios métodos.

Los insectos aéreos, en cambio, pueden ser colectados usando trampas pegajosas, redes entomológicas, trampas de luz, trampas de sonido, feromonas, etc. También pueden emplearse cebos, CO2, insectos trampa, aspiradores, etc. Los insectos acuáticos, pueden ser colectados empleando redes, trampas acuaticas (de varios tipos), o bien tomando muestras de la vegetacion acuatica.

EXTRACCIÓN DE NEMÁTODOS

Insectos cebo (Bedding y Akhurst, 1975)

Este es el método standard para la obtención de nematodos entomopatógenos, e involucra el empleo de larvas del último estadio de lepidoptero Galleria mellonella ((Lepidoptera: Galleriidae), conocido también como "polillas de la cera". Alternativamente pueden usarse otro insectos, como por ejemplo grillos, grillotopos (Orthoptera), gusanos alambre (Coleoptera).

Procedimiento

1. Humedecer la muestra de suelo agregando
2. Colocar aproximadamente 500 cm3 de suelo en un recipiente plástico.
3. Colocar 5 larvas de G. mellonella (u otro insecto) sobre la superficie de la muestra. Cubrir el recipiente con una tapa.
4. Invertir el recipiente, de modo tal que las larvas de G. mellonella queden en el fondo del recipiente, e incubar en la oscuridad a 30°C (si la muestra procede de zonas calidas), 22-25°C (si la muestra procede de una zona templada), o a 15°C (si la muestra proviene de zonas mas frías).
5. Luego de 7 días remover los insectos muertos.

Según sea el estudio a realizar, se pueden agregar nuevos insectos en la misma muestra.

1. Enjuagar los cadáveres en agua destilada esterilizada y colocarlos en una trampa de White.

Ventajas
Método simple

Selectivo para nematodos entomopatógenos

Desventajas
Se requiere de cierto tiempo

No es apropiada para nematodos entomopatógenos que sean específicos de otros insectos

[pic 2]

Fig . Tapers con suelo y larvas de polilla de la cera en la base.

Trampa de White modificada (Kaya y Stock, 1997)

Brevemente los pasos a seguir son los siguientes:

1. Emplear la base de una capsula de Petri de 5 cm de diámetro dentro de la cual se coloca un disco de papel filtro.
2. Colocar esta placa dentro de una placa de Petri de 10 cm de diámetro.
3. Llenar con aprox. 20 mI de agua destilada en la base de la placa mayor.
4. Disponer los cadáveres sobre el papel filtro (en la placa de menor tamaño).
5. Cubrir la placa de mayor tamaño con su tapa respectiva.

No agregar agua en la placa que contiene los cadáveres.

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