Microbiología General. GUIA DE ESTUDIO No. 3 MICROSCOPIA
Enviado por Melisa Chávez • 1 de Marzo de 2020 • Ensayos • 2.009 Palabras (9 Páginas) • 179 Visitas
Universidad de San Carlos de Guatemala
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia
Microbiología General
Licda: Karin Herrera
Sección de Lab: B QF
María Isabel García Díaz 201346557 Gloria Melisa Chávez García 201701364 Dayanna Andrea Karolina Sirín Hernández 201701598 Daniel Antonio Pardo Leal 20183747
GUIA DE ESTUDIO No. 3 MICROSCOPIA
- Realice un esquema en donde pueda observarse la trayectoria de los rayos de luz a través delcondensador, el portaobjetos y el lente objetivo 10X y señale lo siguiente:
- Cuando los rayos de luz atraviesan el portaobjetos de vidrio. ¿Qué forman antes de llegar al lente objetivo?[pic 1]
Los rayos de luz se refractan lo que provoca que la imagen de la muestra se proyecte y aumente para que el ojo humano pueda observarla. (Navarro, 2018)
- De dónde se obtiene Sen θ? Conteste en base al esquema.
La luz viaja a través del colector y choca con el espejo formando un ángulo (Prescott, Harley y Klein, 2002)
- ¿Cuál es la función del condensador?
Es dirigir sobre la muestra el rayo de luz con la abertura numérica y el tamaño de campo adecuado. (Navarro,2018)
- ¿Cuál es la función del diafragma de campo y del diagrama de apertura?
Regular la Apertura Numérica del condensador, para obtener conos luminosos cada vez más estrechos y eliminar los rayos de luz sobrantes (Prescott, Harley y Klein, 2002)
- ¿Qué aumentos pueden tener los lentes objetivos? y los oculares?
El de menor aumento 4X, luego se incluyen objetivos de 10X, 20X, 40x y 100X. Los oculares generalmente emplean oculares de 10X, aunque existen los de 15, 18 y 20x (Tortora, Funke y Case, 2007).
- ¿Cómo se producen las imágenes reales y virtuales en un microscopio óptico. ¿Cuál es la que se ve realmente?
Las imágenes se van ampliando cada vez que pasan por los oculares y lentes. Las imágenes se van ampliando cada vez que pasan por una de estas partes, las imágenes reales a simple vista, no se podrían ver por ser imágenes que oscilan entre dos micras, imposible a la vista humana. Pero al observarlas por el microscopio, la imagen aumenta por los objetivos y los oculares, dependiendo de los valores de aumento de cada uno. (Prescott, Harley y Klein, 2002)
- Explique qué es el poder de resolución (P.R.) de un microscopio óptico.
El poder de resolución es la capacidad de una lente para separar o distinguir entre objetos pequeños que están muy próximos (Prescott, Harley y Klein, 2002)
- ¿Cómo se calcula el P.R. de un microscopio óptico?
Depende de la longitud de onda y de la apertura numérica por lo que la siguiente ecuación esta dada por:
- 0.5= constante
- λ= Longitud de onda utilizada
- A.N= Apertura numérica (Prescott, Harley y Klein, 2002)
- Dibuje un lente objetivo de inmersión, la lámina portaobjetos y la trayectoria de los rayos de luz a través de los mismos e indique lo siguiente:
[pic 2]
- ¿Cuál es la función del aceite inmersión cuando se observa a través del objetivo de 100X?
La función es eliminar la desviación de los rayos de luz, y al mismo tiempo aumentar la eficacia de los objetivos de los microscopios (Gamazo, 2005).
- Señale ¿qué pasa con los rayos que atraviesan el vidrio del portaobjetos donde no hay aceite?
Los rayos se refractan al cambiar de medio y parte de ellos no llega a la lente frontal del objetivo. Es necesario cuando el diámetro de la lente es muy pequeño y para evitar este hecho se utiliza el aceite de inmersión.
- ¿Y qué pasa con estos mismos rayos en la parte de la lámina que si hay aceite?
Los rayos emergentes ya no se apartan de la normal, sino que continuan su camino sin desviación, consiguiendo así que una mayor cantidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visión. (Gamazo,2005).
- ¿Por qué es importante el índice de refracción (n) de aire, del vidrio y de el aceite de inmersión? Explique.
Es importante porqué el índice de refracción del aceite de inmersión es mayor que el del aire. Dicho índice es de 1.5 aproximadamente, y al aumentar el IR, aumenta también la apertura numérica (AN), disminuyendo, por tanto, la distancia mínima y aumentando el poder de resolución. (Navarro, 2018)
- Utilizando la siguiente ecuación, calcule el Poder de Resolución (P.R.) de un microscopio óptico (use sólo la A.N. del objetivo de inmersión).
DATOS:
λ = 530 nm
A.N. objetivo = 1.25
- Calcule: P.R. del microscopio en micras (um)
P.R. = 0.5 ( λ )/A.N. objetivo= 0.5(530)/1.25= 212 um
- ¿Qué significa este resultado? Explique ¿Cuáles son los factores que limitan el P.R. de los microscopios ópticos?
Lo que significa es que el microscopio tiene un poder de resolución de 212 um
El poder de resolución depende de la calidad del sistema óptico del microscopio y la longitud de onda de luz usada. Las longitudes de onda más cortas dan mejor resolución.
También depende de otros componentes como la A. N. del condensador, la alineación correcta de todos los componentes del sistema, y el medio de imagen (Navarro, 2018)
- Sobre el aceite de inmersión:
- ¿Cuáles son las propiedades del aceite de inmersión que aumentan el P.R. del microscopio óptico?
El aceite de inmersión posee un índice de refracción similar al del vidrio. Por tanto, cuando se pone en contacto el aceite entre el lente de 100X y el cubreobjeto, los haces de luz se concentran. (Navarro, 2018)
- ¿Por qué es importante emplear aceite de inmersión cuando observamos bacterias?
Brindar imágenes más claras, nítidas y definidas, permitiendo la observación de detalles que con otros objetivos no sería posible, por ejemplo en las preparaciones Gram, para definir las características morfotintoriales de los microorganismos (Gamazo,2005).
- Ponga 3 recomendaciones para el buen uso del lente de inmersión.
- Limpiar el lente inmediatamente se termine de usar con papel limpia lentes con movimientos en un solo sentido y sin frotar.
- No tocarlo nunca con los dedos.
- Tener precaución al subir la platina y evitar que romper el portaobjetos, ya que este también puede romperse.
(Sigma-Aldrich, 2019)
- Elabore un cuadro con los diferentes tipos de microscopios ópticos que se consideraron en esta unidad del curso: campo claro, campo oscuro, contraste y fluorescencia. Indique sus principales características y su principal aplicación.
Tipo de Microscopio | Características: | Aplicación: |
Campo Claro | Forma una imagen oscura frente a un fondo claro. Formado por un cuerpo de metal compacto, compuesto por una base y un brazo, donde se fijan el resto de las partes. En la base hay una fuente de luz. En el brazo están los tornillos de enfoque, que mueven platina o portaobjetos para enfocar la imagen. En la platina se colocan los portaobjetos, sujetados por unas pinzas. | Se puede utilizar en las aplicaciones biológicas para realizar tinciones o pigmentos naturales o especímenes altamente contrastados montados en un portaobjetos. |
Campo Oscuro | Crea contraste en especímenes transparentes sin tinción como células vivas. Se enfoca un cono hueco de luz sobre la muestra, de manera que no penetren en el objetivo rayos no reflejados y no refractados. | Es ideal para revelar contornos, bordes, fronteras y gradientes de índice de refracción. Útiles en hematología para examinar sangre fresca. Se emplea para identificar bacterias como Treponema pallidum |
Contraste | Convierte diferencias pequeñas en el índice de refracción y la densidad celular, en variaciones en intensidad de luz fácilmente detectables | Se emplean frecuentemente para estudiar las células eucariotas. Útil para detectar componentes bacterianos como endosporas y cuerpos de inclusión que contienen poli-(3-hidroxibutirato, polimetafosfato, azufre u otras sustancias |
Fluorescencia | Expone un espécimen a luz ultravioleta, violeta o azul, y forma una imagen del objeto con la luz fluorescente emitida. | Se pueden identificar bacterias patógenas (p. ej., Mycobacterium tuberculosis, causa de la tuberculosis) después de marcarlas específicamente con anticuerpos fluorescentes, conjugados con fluorocromos, mediante métodos de inmunofluorescencia. |
(Prescott, Harley y Klein, 2002) (Cavallini y Coronado, s.f) (Tortora, Funke y Case, 2007) (Gamazo,2005).
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