Microscopia. Refracción del medio

MICROSCOPIA

Refracción del medio

La refracción es el cambio de dirección y lentitud que experimenta una onda al pasar de un medio a otro con diferente índice refractivo.

Refracción del medio

Lo que hay entre el objetivo y el preparado

Índices de refracción

Agua= 1.00

Alcohol= 1.33

Aceite= 1.50

Poder de resolución

Poder de resolución, capacidad del microscopio de producir imágenes separadas de un objeto que esta muy cerca del otro

A mayor poder de resolución mayor calidad de imagen, y a menor PR menor.[pic 1]

• El poder de resolución y la apertura numérica con directamente proporcionales, si la apertura numérica aumenta el poder de resolución igual.
• Si se reduce la longitud de onda λ (lo cual se logra con filtro azul), aumenta el poder de resolución, ya que son inversamente proporcionales.

Apertura numérica

Luz que viene desde la lampara, o el ambiente, que atraviesa el preparado es captada por el objetivo, la apertura numérica hace referencia a que tanta luz está llegando al objetivo, mientras el objetivo capte más luz es mejor.

[pic 2]

• La apertura numérica de cada objetivo es diferente, y esta aumenta cada que el objetivo aumenta, o sea 4x tiene menor apertura numérica que el de 10x.

OBJETIVO DE 100X

Con la finalidad de que no se pierda calidad de imagen, se debe tener la posibilidad de modificar el índice de refracción del medio, esto sucede cuando se reduce la velocidad de la luz en el medio.

Cuando se aumenta n (índice de refracción) se aumenta A.N y por lo tanto P.R

LIMITE DE RESOLUCION

Es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos, para que puedan ser distinguidos por separado.

Ojo humano = 0,2mm

Microscopio óptico = 0,2 micras

Microscopio electrónico de barrido= 2,5 nanómetros

Microscopio electrónico de trasmisión=0,05 nanómetros

Cuando menor el es limite mayor es el poder de resolución, ya que son inversamente proporcionales

¿diferencia entre límite de resolución y poder de resolución?

• Poder de resolución: capacidad de producir imágenes separadas
• Distancia para ver dos estructuras separadas

FORMULAS

El aumento final de una muestra es igual a el aumento de los objetivos por el de los oculares.

El tamaño del objeto observado es igual a el diámetro del campo visual en micras sobre el número de veces que el objeto cabe en el campo visual

Para calcular el diámetro

[pic 3]

Campo de microscopio

A mayor aumento del objetivo menor es el campo visible de la muestra.

UNIDADES

[pic 4]

TIPOS DE MICROOSCOPIO

Campo oscuro

Para partículas pequeñas, en este la luz atraviesa solo la periferia

Contraste de fase

Las células se pueden ver vida y sin técnica de tinción.

Placa anular

Diafragma anular

Microscopio de Fluorescencia

Para la inmunocitquímica, autofluorescencia

La muestra debe ser autofluorescente

Poseer una sustancia que reaccione fluoresciendo ante determinada longitud de onda.

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMO EN EL LABORATORIO

Microrganismo:         C4H7O2N, el 50% es carbono, el 32% oxigeno, 14% nitrógeno, 3% fosforo, azufre 1% y menos del 1% Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.

Condiciones necesarias

Nutrientes:

Temperatura

PH

aw (actividad del agua)

Clasificación de los microorganismos según las necesidades

Autótrofos, heterótrofos

Obtención de energía

Quimiolitotrofos: son aquellos organismos que utilizan sustancias inorgánicas, por lo general de origen mineral, con el fin de obtener energía y utilizarla en el metabolismo respiratorio.

Quimioorganotrofos: son aquellos que usan sustancias orgánicas, para obtener energía

Autótrofos: producen compuestos orgánicos complejos, a partir del carbono de las sustancias simples como el dióxido de carbono.

Fotolitrofos: organismos que producen su energía a partir de la luz.

Fotoorganotrofos: utilizan la luz y compuestos orgánicos para la fabricación de energía

Mixotrofos: estos utilizan la luz como fuente de energía o tomarla de compuestos orgánicos o inorgánicos.

Según la temperatura

Temperaturas altas

Hipertermofilos

Extremófilos

Temperaturas bajas

Psicrófilos

Hiperpsicrofilos

Mesofílicos estos son tolerantes

PH

Acidófilos 0-5,5

Neutrófilos entre 5,5 y 8

Alcalofilos 8-11,5

Las bacterias crecen en un rango de 6,5 y 7,5

Las levaduras y los mohos pueden crecer a valores de pH más bajo.

...