Microscopia

MICROSCOPIA.

NATALIA VERA DELGADO

1.MARCO TEORICO.

La microscopia es una técnica para lograr imágenes visibles de estructuras de un tamaño diminuto que no se pueden percibir a simple vista, para esto utilizamos el microscopio. Este nos produce un aumento de los objetos que queremos observar. Este nos ha permitido avanzar durante tres siglos abriendo el ojo humano hacia nuevas perspectivas y conocimientos. Es una herramienta indispensable en un laboratorio ya que nos deja explorar las fronteras de la biología.

Siendo la lupa un microscopio simple y el más conocido, fue utilizado por investigadores inicialmente pero el primer microscopio se invento hacia 1610, por Galileo. Este tubo algunas mejoras atreves del tiempo, como en 1619 se presento el primero con dos lentes convexas. Hasta 1674 donde Antón van Leeuwenhoek presenta el primer microscopio simple. En 1931 con Ernst Ruska y Max Knoll construyen el primer microscopio electrónico. En 1965 se desarrolla el primer microscopio electrónico de barrido. En 1981 Gerd Binnig y Heinrich Rohrer desarrollan el microscopio de efecto túnel, y en 1985 Binnig y Rohrer desarrollan el microscopio de fuerza atómica. Después de mucho perfeccionamiento en la actualidad hay microscopios con unos específicos en su uso.

Microscopio invertido se usa para observar cultivos enteros o grandes muestras bajo estados más naturales.

Microscopio compuesto se utiliza para observar objetos con transparencia o cortes tan finos que se presenta esta.

Microscopio de luz ultravioleta para aumentar la resolución de muestras como ácidos nucleícos y sus resultados se dan en fotografías.

Microscopio Fluorescente , es una variación del anterior pero este se usa para detectar sustancias con auto fluorescencia (vitamina A)

Microscopio de luz polarizada es para ver muestras ricas en materiales birrefringentes, puesto que mejora de manera incomparable la calidad de la imagen.

Microscopio de contraste de fases en este se pueden observar las células vivas con gran nitidez.

Microscopio de campo oscuro se emplea para ver células vivas (protozoarios, bacterias, células descamadas, etc.) en las cuales no se han aplicado sustancias fijadoras ni colorantes.

Microscopio electrónico de transmisión se caracteriza por usar una muestra ultra fina y la imagen se obtiene de los electrones que atraviesan la muestra.

Microscopio electrónico de barrido enfoca los rayos catódicos o electrones formando una imagen en 3D y permitiendo la observación y la caracterización de materiales orgánicos e inorgánicos.

1.1 CUIDADOS BASICOS:

a. Tomar el microscopio con ambas manos, por la base y la columna.

b. Cuando se coloca sobre una mesa , debe evitarse que reciba algún golpe, sea el mas mínimo, por esto se apoya con los dedos aun debajo de la base y cuando esta en la posición que queremos quitarlos lentamente.

c. Jamás arrastrar el microscopio

d. Asegurarse de que el microscopio se enciende y funciona correctamente.

e. Cambie de objetivos usando solo el revolver,

f. Asegure con cuidado e portaobjetos con el gancho.

g. Al terminar de usar placa , se debe de limpiar con cuidado la platina con una servilleta de papel.

h. Apague el interruptor , y espero al que el bobillo se apague. Después baje la platina a una posición inicial y en el objetivo de mejor aumentó.

1.2 PODER DE AUMENTO DEL MICROSCOPIO

Es la facultad que tiene para aumentar el tamaño de un objeto que observamos. El poder de aumento es de 10 veces. si se da entre Aumento del objetivo x Aumento del ocular: 40X x 10X = 40X.

1.3 DIAMENTRO DEL CAMPO VISUAL

Es el área que observamos. Cambio de acuerdo a el objetivo que utilicemos. Se calcula (valor del numero del campo (18mm))/(Aumento del objeto) , como consecuencia siempre se reducirá al aumentar el objetivo.

Teniendo el diámetro del campo se puede calcular el tamaño de una muestra.

Tamaño de células =(Diametro de campo visual ("" d))/(Numero de celulas obsevadas).

OBJETIVO AUMENTO DEL OBJETIVO DIAMETRO DEL CAMPO AREA DEL CAMPO VISUAL DIMENCION DE LA LETRA

4 X 4 X 4,5 mm 31,79 mm 0,45 mm

10 X 10 X 1,8 mm 5,03 mm 0,18 mm

40 X 40 X 0,45 mm 0,31 mm 0,45 mm

100 X 100 X 0,18 mm 0,05 mm 0,018 mm

3.4 PODER DE RESOLUCION DEL MICROSCOPIO

Es la capacidad que se tiene con ese microscopio de poder ver dos puntos en forma separada. Cuando la distancia entre los puntos disminuye se llega a un límite a partir del cual ya no se ven los puntos en forma separada, sino unidos. En ese momento se ha alcanzado el límite de resolución del microscopio.

Tenemos que el poder de resolución es (R)=("" (640nm))/(2(AN)).

3.5 UNIDADES DE EQUIVALENCIAS

1 mm = 1,000 um 1 um = 1,000 nm

1 um = 0,001 mm 1 nm = 0,001 um; 1X〖10〗^(-6) mm

1.6 PREGUNTAS GUIA UNIFICADA DE LABORATORIO

1.Cuales serán los poderes de resolución de los objetivos 4X y 10X?

4X : 640/(2(0,10)) =3,200

10X: 640/(2(0,25)) =1,280

2.Cuantos um caben en 20 mm?

20 mm x (1,000 um)/1mm = 20,000 um

3.Cuantas veces es menor 1um que 1mm?

1 um es 1000 veces menor que el mm.

4.Cuantos um hay en un 0,1mm?

0,1mm x (1000 um)/1mm = 100 um

5.Cuantas veces mayor 0,674mm que un 1um?

0.674 mm son 674 veces mayor que 1um

6.De acuerdo con el grosor encontrado en un cabello, cuantos um tiene este de grueso?

0,08mm x (1,000 um)/(1 mm) = 80 um

7. Si se supone que el diámetro de un grano de polen es de 0.05 mm; cuántos cabrán en 2600 um y en 10 mm?

- 2,600um x (0,001 mm)/(1 um) = 2,6 mm entonces 2,6mm/0,05mm = 52 . La respuesta es que en 2600um caben 52 gramos

- 10mm/0.05mm= 200 entonces en 10mm caben 200 granos.

-150nm / 1000um/1nm =0,15 um / 1000/1um = 0,00015 mm . 0,00015mm/0,05mm = 0,01 No hay Granos de polen.

8. Ordene los microorganismos A, B y C en orden ascendente según su tamaño:

A: 130um B:0,006mm C:54,000nm

- 0,006mm x (1000 um)/(1 mm) = 6 um

-54,000nm x 1000um/( 1 um) = 54 um

2.MATERIALES .

Microscopio

Portaobjetos

Cubreobjetos

Servilletas de Papel.

Hilos de color

Gotero

Tijeras

Cabello humano

Granos de polen

Papel periódico

METODOS

Primero comprobamos que los microscopios funcionaran correctamente. Limpiamos los dos portaobjetos y con un gotero procedimos a colocar las dos gotas en este, creando dos muestras en cada uno. En una de las gotas colocamos un grano de polen y en la otra una porción del cabello, a continuación se colocaron los cubreobjetos en un ángulo para evitar la formación de burbujas. En el caso del polen se presiona un poco el grano de polen para obtener una buena muestra.

En el otro portaobjetos se hace lo mismo en cuento al gotero, pero se coloca la muestra de hilo y de una letra (e) de papel periódico y se hace lo mismo con el cubreobjetos.

Se coloca la primera muestra que es polen en las pinzas del microscopio y centra en el orifico de la platina con ayuda de las perillas del carro. Con el uso del macrométrico posicionamos mejor la muestra (polen) en el objetivo 4X, después se aumenta gradualmente con los objetivos de 10X, 40X , todo esto graduando el micrométrico y el macrométrico para obtener una imagen nítida. Se proceden a tomar las fotos en cada aumento.

Para las demás muestras se realizó el mismo procedimiento, pero en la muestra de cabello humano se posiciono en el objetivo 100X haciendo uso del aceite de inmersión.

3.RESULTADOS Y ANALISIS.

3.1 MUESTRA DE POLEN EN OBJETIVO 4X

Aunque la imagen es borrosa y no se enfoca bien se ven unos pequeños puntos, conjuntos de polen.

3.2 MUESTRA DE POLEN EN OBJETIVO 10X

Vemos que los granos de polen se agrupan en pequeños grupos.

3.3 MUESTRA DE POLEN OBJETIVO 40X

El polen se agrupa de la misma forma, en pequeños grupos, pero esta vez con menor número de polen y se alcanza a ver pequeñas estructuras dentro del mismo.

3.4 MUESTRA DE CABELLO HUMANO EN OBJETIVO 4X

Se ve el cabello de una manera delgada y su color un poco más claro.

3.5 MUESTRA DE CABELLO HUMANO EN OBJETIVO 10X

Se ve con mas definición y claridad la fibra y sus características, se ve un de un tono claro aun

3.6 MUESTRA DE CABELLO HUMANO EN OBJETIVO 40X

observamos con detalles algunas pequeños imperfectos en el cabello , pero se ve con mas textura.

3.7 MUESTRA DE CABELLO HUMANO EN OBJETIVO 100X podemos observar sus imperfecciones, el cabello se ve demasiado grueso, fibroso y el color cambia, es decir se ve más claro.

3.8 MUESTRA DE HILO EN OBJETIVO 4X

Se ven las fibras entrelazadas que conforman el hilo.

3.9 MUESTRA DE HILO EN OBJETIVO 10X

Observamos mas definidamente como se entrelazan y cada parte de ellas.

3.10 MUESTRA DE HILO EN OBJETIVO 40XVemos solo algunas fibras con muchas definición ya que el campo de visión se pierde .

3.11 MUESTRA DE PAPEL PERIDÓDICO (LETRA e ) EN OBJETIVO 4X observamos que el color es más claro y en el borde de la letra se difumina , viendo la estructura del papel.

3.12 MUESTRA DE PAPEL PERIDÓDICO (LETRA E ) EN OBJETIVO 10X arte de la letra se pierde el campo visual se pierde la letra del campo visual pero vemos aun mas de cerca la estructura del papel y se empieza a ver la tinta.

3.13 MUESTRA DE PAPEL PERIDÓDICO (LETRA E ) EN OBJETIVO 40X se observa el pigmento de la tinta sobre el del papel y su estructura.

4. CONCLUCIONES.

- Aprendí a manipular con destreza el microscopio, además a diferenciar los enfoques para cada muestra con los aumentos pedidos en la guía. No fue muy fácil al principio porque antes no tenía mucho conocimiento en prácticas con uso del microscopio, fue de verdad una experiencia gratificante .

-Documente mediante fotos los resultados de cada aumento con los diferentes objetivos en las muestras notando como el campo de visión va disminuyendo entre mas aumento .

- Comprobé que el polen se agrupa en granos y en pequeños grupos.

-Observe como la tinta se mezcla con la estructura del papel.

5. CUESTIONARIO

5.1 PRINCIPIOS FISICOS DE LA MICROSCOPIA DE LUZ.

5.1.1 Refracción: Es la desviación que sufre la luz al pasar el límite entre dos medios transparentes y de diferente densidad , tales como el aire y el cristal de una lente. El ángulo de refracción depende del ángulo de incidencia de la luz, de su frecuencia de onda y de la diferencia de densidad. Por estas razones, las lentes convexas convergen la luz en un punto (punto focal), mientras que las cóncavas la dispersan, mientras que la luz blanca se descompone en los colores del arco iris, ya que cada color tiene diferente frecuencia de onda.

5.1.2 Aumento :relación entre el tamaño aparente y el tamaño real de un objeto, logrado con un sistema óptico. El término también se usa para señalar la capacidad de una lente ya probada.

5.1.3 Poder de Resolución: capacidad de un sistema óptico de discernir como objetos independientes aquellos objetos que están separados pero muy próximos entre sí. El poder de resolución de un sistema óptico depende de la longitud de onda utilizada para la observación. En líneas generales corresponde a la mitad de la longitud de onda utilizada.

5.2 OTROS TIPOS DE MICROSCOPIA.

5.2.1 Microscopía de campo brillante: El material se observa sin coloración. La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estén naturalmente coloreados.

5.2.2 Microscopía en contraste de fase: Se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal para especímenes delgados, o células aisladas.

5.2 .3 microscopía diferencial de contraste de interferencia (DIC). :Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imágenes combinadas aparecen como si la célula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseñado para observar relieves de especímenes muy difíciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de fertilización in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espécimen es muy grueso para usar contraste de fases

5.2.4 Microscopía de fluorescencia: una sustancia natural en las células o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante.

6. REFERECIAS

Colaboradores de buscador electrónico google. Potencial eléctrico [en línea].

*http://es.wikipedia.org/wiki/Microscop%C3%ADa

*http://personales.mundivia.es/mggalvez/micro2.htm

*http://www.slideshare.net/taicher90/microscopio-presentation-930782

*http://www.monografias.com/trabajos7/micro/micro.shtml

*http://www.ipb.csic.es/servicios/Microscopia/uploads/3/6/2/2/3622788/microscopia_a_grandes_rasgos.pdf

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