Objetivos De PCR Y Electroforesis

Objetivos

• PCR

 Generales:

• Amplificar la muestra de ADN previamente extraído por medio de la Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR).

 Específicos:

• Valorar las aplicaciones de esta técnica en la Medicina, mediante la comprensión sus fases, métodos y materiales.

• Realizar la replicación del material genético mediante el conocimiento apropiado del proceso de Amplificación.

• Reconocer el procedimiento empleado para preparar el Mix de trabajo y el uso del equipo de laboratorio (Termociclador, Cámara de Flujo Laminar).

• Comprender cuál es la razón por la que se usan diferentes temperaturas y ciclos para realizar este procedimiento, además de saber diferenciar los reactivos usados en el Mix de trabajo.

Preguntas iniciales:

-Explique que es la clonación acelular de ADN y cuál es la técnica de laboratorio que nos permite realizar este procedimiento.

La clonación acelular se refiere a un procedimiento por el cual se logra que los ácidos nucleídos tanto ADN como ARN se repliquen, sin la necesidad de de usar una célula para lograr el objetivo. Se producen copias de un gen o una parte de ADN la cual se la somete a un proceso conocido como "Amplificación", llamado también Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR sus siglas en Ingles).

-Cuál es la utilidad del PCR en la práctica clínica?

La gama de utilidad de este procedimiento es bastante alta, y más en cuanto a su aplicación clínica. Principalmente su aplicación comienza en el rastreo de mutaciones para prevenir enfermedades, tanto parentales como adquiridas. Se usa principalmente para detectar secuencias de ADN que se conoce, para buscar alteraciones en ellas. Finalmente podríamos decir que la aplicación mas grande de este proceso es la detección de células tumorales, incluso antes de que el cáncer se genere, por lo que permite

-Cuales son las ventajas y desventajas del PCR?

Ventajas:

-Tiene una gran sensibilidad y especificidad.

-Es una técnica con la cual se puede detectar la presencia de ADN viral.

-Especifica el tipo viral, y a qué grupo pertenece, facilitando su tratamiento.

-Cuenta con controles internos que aseguran que no se reporten resultados falsos negativos.

Desventajas:

-Proceso dependiente de cambio de temperaturas en tiempos exactos, lo que puede producir errores al momento de programar el termociclador.

-Es un método ya no tan usado actualmente, fue reemplazado por el uso de la secuenciación

-Se necesitan primers específicos que sean complementarios a la cadena que se desea buscar.

-Riesgo de contaminación de la muestra.

o Electroforesis

 Generales:

• Lograr separar las distintas especies químicas de la muestra (ADN o proteínas) de acuerdo a su peso molecular, carga eléctrica y su tamaño, usando la técnica de Electroforesis.

 Específicos:

• Reconocer la funcionalidad del uso del gel poroso en el proceso, y su elaboración.

• Valorar el uso del campo eléctrico aplicado en la muestra, y que equipo realiza este proceso.

• Establecer diferencias en cuanto al resultado obtenido, comprendiendo el uso de la regla de pesos moleculares.

Preguntas iniciales:

Explique la técnica o técnicas más utilizadas para la identificación del ADN.

La principal técnica que se empleaba habitualmente en laboratorios clínicos es la electroforesis, la cual depende de una amplificación previa. En la actualidad se usa mas la técnica de secuenciación de ADN o también la llamada RFLP que se refiere a detección de polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción (del inglés Restriction Fragment Length Polymorphism). En el futuro se usara mucho mas la nueva tecnología del biochip, que surge en la combinación entre técnicas microelectrónicas empleadas para la fabricación de microprocesadores informáticos y materiales biológicos, para tener una identificación más eficiente y veraz.

¿De qué tejidos se pueden obtener cantidades importantes de ADN?

Generalmente de tejido que se reponga constantemente como tejido epitelial y sus anexos, muestras de secreciones como saliva o sangre son las más utilizadas por la amplia presencia de células. En casos de investigación forense se usa tejido óseo pulverizado.

¿Cuáles son los tejidos menos invasivos para la obtención de ADN?

El conocido raspado bucal con hisopo es el método mas conocido en cuando a criminalística por la facilidad de su obtención, al igual que secreciones corporales fáciles de obtener.

¿Cuáles son los principales métodos de identificación y visualización del ADN?

• PCR

• La electroforesis en gel

• Secuenciación del ADN

• Southern Blot

• RFLP

Conclusiones

o PCR

 Se logro la amplificación de la muestra de ADN a través del proceso de PCR en un medio acelular.

 Se reconoció y valoro la importancia de la técnica y los métodos y materiales usados para su desarrollo.

 Finalmente logramos concluir que el proceso de PCR es relativamente sencillo en la práctica, pero tiene su alto grado de complejidad en cuanto a las reacciones internas. Al conocer los métodos y el desarrollo de la practica pudimos diferenciar sus aplicaciones y valorar su importancia.

o Electroforesis

 Se logro separar y medir los fragmentos previamente amplificados de ADN, mediante la visualización por electroforesis en gel poroso.

 Valoramos la importancia y utilidad de esta práctica de visualización de ADN, reconociendo todos los equipos y materiales involucrados en la técnica.

 Para concluir, se pudo diferenciar las diferentes etapas de la prueba, y su resultado final, el cual se logro interpretar correctamente gracias a la regla de pesos moleculares. De esta manera se conoció finalmente todo el proceso de extracción, purificación, amplificación y visualización del acido nucleíco proveniente de una muestra sanguínea.

referencuas

http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/forensetec.htm

...