PRACTICA DE LABORATORIO 7: SUSCEPTIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS

PRACTICA DE LABORATORIO 7: SUSCEPTIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS                                                                                                                                                   Daniela Salcedo Ortiz1                                                                                                                                        1Estudiante del programa de Química de la Universidad del Atlántico. Puerto Colombia- Atlántico                               23605- BIOTECNOLOGIA

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RESUMEN

A través de un simulador online se realizaron las pruebas para determinar la susceptibilidad de un cultivo microbiano frente a diferentes antibióticos tales como: estreptomicina, cloranfenicol, gentamicina, ciprofloxacina, penicilina y doxiciclina por el método de difusión de discos o también llamado metodo de Kirby Bauer ; se logró observar su reactividad frente a estos y establecer si dicho microrganismo era susceptible, resistente o presenta una susceptibilidad intermedia a estar en contacto.

Palabras claves: Antibiotico, discos, cultivo microbiano, susceptibilidad, resistencia.

INTRODUCCIÓN

El control científico del crecimiento microbiano comenzó hace sólo alrededor de 100 años. A mediados de la década de 1800 el médico húngaro Ignoz Semmelweis y el médico inglés Joseph Lister utilizaron este razonamiento para desarrollar algunos de las primeras prácticas de control microbiano poro los procedimientos médicos. Estas prácticas incluían el lavado de los monos con cloruro de calcio para destruir o los microbios y el empleo de técnicas de asepsia quirúrgica para prevenir la contaminación microbiana de las heridas quirúrgicas. [1] Sin embargo, estas no eran suficientes para controlar la propagación de los microorganismos y evitar las enfermedades producidas por dichos patógenos. Durante todo el siglo pasado los científicos continuaron desarrollando una diversidad de métodos físicos y agentes químicos para controlar el crecimiento microbiano, a lo que llamaron técnicas antibióticas o antimicrobianas.

Para evaluar la eficacia de un agente frente a la actividad microbiana, existen muchos tipos de pruebas, en este caso analizaremos una en especial, La prueba de Kirby Bauer o El método de difusión con disco. Este consiste en: Un disco de papel de filtro se embebe con una sustancia química o un antibiótico y Los discos antibióticos seleccionados se colocan en la superficie de una placa de agar previamente inoculada e incubada con el microorganismo de prueba. [1][2]

Durante el período de incubación, el antibiótico o el químico se difunden hacia afuera desde los discos hacia el agar. Esto creará un gradiente de concentración en el agar que depende de la solubilidad de la sustancia química y su tamaño molecular. La ausencia de crecimiento del organismo alrededor de los discos de antibiótico indica que el organismo es susceptible a ese antibiótico y la presencia de crecimiento alrededor del disco de antibiótico indica que el organismo es resistente a ese antibiótico en particular. Si la sustancia química es eficaz después de la incubación se puede observar una zona clara que representa la inhibición del crecimiento alrededor del disco.

[pic 5]En la imagen 1, se presenta un antibiograma como resultado de una prueba de Kirby Bauer, en ella se nota como un agente microbiano presenta diferentes reacciones ante distintos químicos o antibióticos. Luego de la inoculación, por 24 horas, se miden los halos de inhibición y se determina si el microrganismo es:

Sensible (S).

Intermedio o Moderadamente sensible (I)

Resistente (R). [3]

Figura 1.  Antibiograma

METODOLOGÍA

1. Seleccione una placa de cultivo puro de uno de los organismos a analizar. Recuerde que el asa de inoculación debe estar previamente esterilizada.

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1. Emulsifique asépticamente una colonia de la placa en la solución salina estéril. Mezcle bien para asegurarse de que no se vea material sólido de la colonia en la solución salina.

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1. Tome un hisopo estéril y sumérjalo en el caldo de cultivo del organismo. Apriete suavemente el hisopo contra el interior del tubo para eliminar el exceso de líquido en el hisopo.

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1. Tome una placa de agar Mueller-Hinton estéril (MHA) o una placa de agar nutritivo (NA). Use el hisopo con el organismo de prueba para rayar una placa de MHA o una placa de NA para un césped de crecimiento.

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1. Se toman los discos de cada uno de los antibióticos

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1. Se toma el disco antibiótico y se lleva hasta la placa con el agar.

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1. Presione suavemente los discos sobre la superficie del agar con unas pinzas esterilizadas por llama o un asa de inoculación.

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1. Invierta cuidadosamente las placas inoculadas e incube durante 24 horas a 37°C.

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1. Después de la incubación, use una regla métrica para medir el diámetro de la zona de inhibición para cada antibiótico utilizado. Compare la medición obtenida de los antibióticos individuales con la tabla estándar para determinar la zona de sensibilidad y determinar si la especie bacteriana analizada es sensible o resistente al antibiótico analizado.

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