PREPARACION DE MUESTRAS

PROBLEMATIZACION:

INDIQUE 4 DIFERENCIAS BASICAS EN LA PREPARACION DE MUESTRAS PARA EL MICROSCOPIO OPTICO Y PARA EL MICROSCOPIO DE BARRIDO.

MICROSCOPIO OPTICO

1.- Fijación: en este proceso la descomposición de la célula muerta, y se mantiene su estructura morfológica. Los líquidos fijadores utilizados son el alcohol, el acido acetilico y el formaldehído o formol.

2.- Inclusión y corte: como el material resultante de la fijación es muy blando para poder cortarlo, se procede a endurecer el material en una sustancia plástica que generalmente es parafina o resina, quedando apto para que se realice el corte con un instrumento llamado micrótomo.

3.- Tinción: este método es utilizado para colorear artificialmente las estructuras celulares.

4.-Contraste: Cuando sea necesario, aumentar el contraste entre los elementos estructurales de los materiales y el fondo.

MICROOSCOPIO DE BARRIDO

Deben estar secas y emplea dos técnicas preparatorias: secado por congelación y secado por punto crítico, después se cubre la muestra con una capa de metal( oro o platino)

1.- Fijación: Las muestras que se van a estudiar al SEM no requiere de una fijación específica o distinta a las ya indicadas en las técnicas de microscopía tratadas, es decir tanto las muestras fijadas para microscopía óptica como para el TEM pueden ser observadas satisfactoriamente en este tipo de microscopía. En general, la mayoría de estudios al SEM suelen decantarse por fijadores aldehídicos, ya que son los mayoritariamente utilizados para el TEM.

2.-Postfijación. La postfijación en las muestras preparadas para el SEM es completamente facultativa, encontrando tanto referencias bibliográficas en las que esta etapa esta considerada en el protocolo de tratamiento de la muestras, como referencias en las que se obvia completamente. El tetróxido de osmio es el postfijador más utilizado, tanto por su capacidad de fijar los lípidos, como por favorecer ligeramente el contraste de la muestra, sobre todo en aquellas cuyo patrón morfológico es muy sutil.

3.-Deshidratación: para el estudio al SEM, al igual que la TEM, la muestra se ha de deshidratar, ya que algo de humedad dentro del la cámara provocaría un mal funcionamiento del microscopio, ya que el vacío no sería adecuado y el haz de electrones se perturbaría. Normalmente la deshidratación se realiza en un gradiente creciente de alcoholes etílicos hasta etanol absoluto, aunque en algunos casos es necesario deshidratar las muestras hasta acetona. El último compuesto de la deshidratación se denomina líquido intermediario.

4.-Desecación: la desecación es el paso por el cual la muestra pierde súbitamente toda sustancia líquida, sin que se vea mermada la estructura o morfología de ésta. Para ello se utiliza un líquido de transición que tiene una sublimación muy rápida, para evitar toda tensión superficial y que la muestra conserve un aspecto lo más cercano posible a estado natural. Existen diversas formas de llevar a cabo la desecación, pero las que mejor rendimiento dan son: el punto crítico y el tratamiento con compuestos orgánicos volátiles. El punto crítico se realiza en un dispositivo donde, a una temperatura de 31º y una presión de 74 bar, el CO2 líquido desplaza a la acetona completamente, para posteriormente despresurizar sublimando el CO2 a gas de manera súbita (lámina 1). En el otro método, la acetona se ve desplazada por un líquido orgánico de alta volatilidad, como el hexametildisilizano (HMDS), que a temperatura y presión ambiental evaporará rápidamente.

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EVALUACION FORMATIVA:

A) ¿Qué estructuras se observan en el montaje húmedo (agua) en 40x?

Euglema: Poseen un flagelo largo que sobresale del reservorio con mastigonemas en una fila, con un engrosamiento en el extremo proximal. También puede aparecer un flagelo corto que se fusiona con la base del flagelo largo.

Paramecio: (género Paramecium) son protozoos ciliados con forma ovalada, habituales en aguas dulces estancadas con abundante materia orgánica, como charcos y estanques. Son probablemente los seres unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la Ciencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0.5 milímetros.

Chlorella: es un género de algas verdes de unicelulares, del filo Chlorophyta. Tiene forma esférica, midiendo de 2 a 10 μm de diámetro, y no posee flagelo. Chlorella contiene los pigmentos verdes fotosintetizadores clorofila-a y -b en su cloroplasto. A través de la fotosíntesis se multiplica rápidamente, requiriendo sólo dióxido de carbono, agua, luz solar y pequeñas cantidades de minerales.

Volvox :es un género de algas clorofíceas microscópicas que suele formar colonias o cenobios de forma esférica y hueca, rodeados por células superficiales biflageladas y unidas entre sí por conexiones citoplasmáticas

Biología, 7ma ed (2005). Neil A. Campbell, Jane B. Reece l.

-Biología “La vida en la tierra”, 6ta ed .(2003) T. Audesirk, G. Audesirk & B. Byers.

b)¿Qué conclusiones puede sacar de la utilización de diferentes aumentos?

10X - aumenta 10 veces el tamaño del objeto

Es útil para enfocar la muestra pero la resolución es baja.

40X

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