PREPARACIÓN DE SOLUCIONES Y LECTURA ESPECTROFOTOMÉTRICA

1. TEMA:

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES Y LECTURA ESPECTROFOTOMÉTRICA

2. OBJETIVO(S)

2.1 OBJETIVOS GENERALES

* Preparar correctamente soluciones para la ejecución de prácticas de laboratorio.

* Aplicar la Espectrofotometría como una técnica cualitativa y cuantitativa de análisis.

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS ESPECÍFICOS

* Realizar los cálculos teóricos mediante la aplicación de fórmulas y/ó factores de conversión, para en la práctica preparar soluciones a partir de solutos sólidos o líquidos aplicando normas de bioseguridad, utilizando correctamente materiales y equipos en el laboratorio.

* Analizar conceptos relacionados con la espectrofotometría, para entender su importancia como técnica de análisis bioquímico.

* Realizar la lectura de la Absorbancia de una banco de diluciones de orina en el espectrofotómetro y correlacionar los resultados con la concentración expresada en porcentaje y la transmitancia de cada muestra analizada.

3. FUNDAMENTO TEORICO

ANÁLISIS BIOQUÍMICO

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

1 gradilla

6 tubos de ensayo pequeños limpios y secos.

1 pipetas graduadas de 5 y 10 ml

1 pera de succión

2 vasos de precipitación de 100 y 250 ml

1 balón aforado de 250 ml

1 varilla de agitación

1 probeta de 100 ml

1 espátula

Parafina

Espectrofotómetro,

Balanza analítica.

Ácido Acético, Cloruro de sodio, Amoniaco

A) INTRODUCCIÓN

Un análisis bioquímico o clínico es la exploración complementaria de líquidos y/ó especímenes biológicos que permiten: interpretación de resultados, diagnóstico médico, valoración del pronóstico, valoración del tratamiento, investigación, ensayos clínicos, conocimiento de patologías, análisis del metabolismo.

El resultado de un análisis se interpreta frente a valores de referencia establecidos para cada población y requiere de una interpretación médica.

Por un lado está la prueba diagnóstica realizada y su resultado, y por el otro, la interpretación que el médico, respetando cada campo profesional.

Lo más importante es que al realizar un análisis, siempre se deben tener en cuenta ciertas características propias de una prueba diagnóstica. Algunos de estos aspectos clave son:

1. Exactitud: Grado de concordancia entre el resultado y un valor de referencia certificado. En ausencia de exactitud se tiene error sistemático.

2. Precisión: Grado de concordancia entre los datos obtenidos de una serie. Refleja el efecto de los errores aleatorios producidos durante el proceso analítico.

3. Sensibilidad: Capacidad para discriminar entre pequeñas diferencias de concentración del analito. Se evalúa mediante la sensibilidad de calibración, que es la pendiente de la curva de calibración a la concentración de interés.

4. Límite de detección: Concentración correspondiente a una señal de magnitud igual al blanco más tres veces la desviación estándar del blanco.

5. Selectividad: Cuantifica el grado de ausencia de interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz.

6. Seguridad: Amplitud de condiciones experimentales en las que puede realizarse un análisis.

Las pruebas de laboratorio constituyen un factor fundamental en el diagnóstico, evaluación, tratamiento y pronóstico de la mayoría de las afecciones humanas. Durante todo el procesamiento de la muestra, pueden ocurrir situaciones que se escapan al control, muchas veces por factores externos y otras por circunstancias propias del procedimiento, las cuales deben ser detectadas, registradas y resueltas: este es el caso de las no conformidades del sistema. En otras ocasiones los profesionales del laboratorio clínico y las instituciones en las que trabajan, se ven inmersos en incidentes de trabajo que no tienen que ver con situaciones internas del laboratorio, sino por condiciones legales, éticas, morales o de comunicación con agentes externos, los cuales deben ser correctamente solucionados en procura de preservar la imagen del laboratorio o de la Institución.

PROGRAMACIÓN DEL TRABAJO EN EL LABORATORIO CLÍNICO

Los análisis clínicos comprenden tres fases perfectamente diferenciadas:

FASE PRE ANALÍTICA:

Conjunto de actividades realizadas desde el momento en que se recibe la petición analítica hasta que se inicia la fase analítica, sus etapas son:

Formulación Pedido o Solicitud de Examen.

Recepción del Pedido de Examen

Preparación del paciente

Obtención del espécimen

Identificación y trazabilidad de la muestra

Manipulación, conservación y envío de muestra

Aceptación o rechazo de la muestra.

Revisión del Método (Fundamento, Composición, Técnica, Valoración)

Preparación de materiales, reactivos y equipos.

La calidad, la estabilidad, la cadena de frío y la caducidad de los reactivos son aspectos claves por donde se empieza a garantizar un buen resultado en la etapa analítica.

Equipos: la calibración, verificación y mantenimiento de los equipos son fundamentales, y son fuente de no conformidades, especialmente porque se manejan con un erróneo criterio de contención de costos.

FASE ANALÍTICA:

Conjunto de actividades directamente relacionadas con la ejecución analítica, sus etapas son:

Recurso humano: La primera y por lo tanto la más importante es la competencia del personal con base en su educación formación, habilidades y experiencia.

El control de calidad interno: en algunos casos no realizado, en otros realizado a intervalos no definidos y en otros aunque realizados no registrados o analizados. Los costos de los controles no son negociables.

Aplicación del Método y Obtención de datos de la Prueba

FASE POSTANALÍTICA:

Conjunto de actividades realizadas con posterioridad a la ejecución analítica, sus etapas son:

Esta es la etapa definitiva, en la cual el profesional del laboratorio se compromete con un resultado que va a tener importantes implicaciones en el paciente, bien sea positiva o negativa, mediante la aplicación de fórmulas, factores etc.

Verificación de los resultados e Interpretación: cada resultado está reflejando la situación de un paciente, y en ese sentido su análisis es individual. La calidad del resultado la garantiza el tecnólogo médico y no la máquina. En ocasiones la no conformidad se presenta por confiar ciegamente en la máquina.

Elaboración Informe de Resultados o Exámenes realizados

Diagnóstico final (Personal responsable, únicamente el o la médico).

B) TÉRMINOS RELACIONADO CON EL ANÁLISIS:

Espécimen: Material biológico para el análisis sangre, orina, heces, saliva, esputo, liquido cefalorraquídeo, líquido pleural, líquido amniótico, líquido ascítico, etc.

Muestra: Parte representativa de la materia o espécimen objeto del análisis.

Analito: Especie química o sustancia que se analiza.

Solución estándar o disolución estándar: Disolución que contiene una concentración conocida de un analito o sustancia específica, llamada patrón primario, empleado para valorar las concentraciones de otras soluciones.

Blanco de reactivo: Es la solución en la cual están todos los componentes menos el que desencadena la reacción coloreada o analito generalmente se utiliza agua destilada o el reactivo de trabajo.

Método: Conjunto de operaciones y técnicas aplicadas al análisis de una muestra.

Técnica: Medio de obtener información sobre el analito.

Análisis: Estudio de una muestra para determinar sus composición o naturaleza química.

C) MÉTODOS DE ANÁLISIS

1. MÉTODOS CLÁSICOS:

1.1 MÉTODOS CUALITATIVOS: Métodos que permiten valorar calidad, considerada una propiedad existente que pueda ser analizada como tal, comparada con otra similar, afín o de la misma especie, así se tiene las características organolépticas como textura, olor, color, aspecto. En el análisis de muestras y/ó líquidos biológicos no se aplica el sabor. El reporte puede ser: positivo, negativo, reactivo, no reactivo, presente, ausente…..etc.

1.2 MÉTODOS CUANTITATIVOS: Métodos que permiten valorar cantidad, examinar los datos de manera científica, específicamente en forma numérica, determinar la concentración de analítos de interés diagnóstico. El reporte es en concentraciones (densidades).

2. MÉTODOS QUÍMICOS

2.1 MÉTODOS GRAVIMÉTRICOS: Determinan la cantidad de una sustancia por el peso.

2.2 MÉTODOS VOLUMÉTRICOS: Sinónimo de valoración o titulación son:

2.2.1 POR LAS REACCIONES:

Método Volumétrico de Neutralización (Acido – Base): Se utilizan reactivos valorantes para determinar la concentración de un analito o sustancia en la muestra, mediante reacciones acido–base.

Método Volumétrico de Precipitación: Determinación de iones o sustancias en la muestra con reactivos valorantes que sean capaces de formar precipitados.

Método Volumétrico de Oxido-reducción: Mediantes reactivos valorantes de oxidación se determina la concentración de un analito o sustancia reductoras por pérdida y ganancia de electrones y viceversa.

Método Volumétrico de Formación de complejos: Mediantes reactivos valorantes de se determina la concentración de un analito o sustancia por formación

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