PROCEDIMIENTO. Acides de los aminoácidos

PROCEDIMIENTO.

Acides de los aminoácidos.

En un tubo de ensayo, colocamos 1 ml de solución de glicina, calentamos en baño de maría y luego agregamos 0.1 gr de carbonato cúprico posteriormente observamos si hay reacción. Calentamos hasta que la reacción cese, luego enfriamos en baño de hielo, decantamos la solución azul, para separarla del carbonato cúprico en exceso, evaporamos  la solución sobre un vidrio de reloj de baño de maría. Observamos la formación de cristales azules de la sal de cobre del aminoácido.

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Observaciones:

Esta prueba es utilizada para determinar el carácter ácido, la reacción ocurre con una base o con la sal de un ácido débil: en este caso la glicina al añadir carbonato cúprico, reacciona liberando dióxido de carbono en forma de gas y agua al ser colocado en baño maría, donde la solución azul que queda al ser exhibida al calor y luego por ende se evapore, formación de cristales azules lo cual es la sal del complejo de ácido amino acético y cobre.

Resultados:

• Glicina = positivo.

Reacción con Ninhidrina.

Colocamos en 6 tubos y por separado 1 ml de glicina, 1 ml de tirosina, 1 ml de ácido glutámico, 1 ml de arginina, 1 ml de leche y 1 ml de albumina de huevo respectivamente. Agregamos a cada tubo 1 ml de solución de ninhidrina. Agitamos y calentamos los tubos en baño de maría, la formación de un complejo de color azul detecta la presencia de aminoácidos libres.

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De izquierda a derecha: Glicina, tirosina, ácido glutámico, arginina, albumina de huevo, leche.

Observaciones.

Al realizar este ensayo se encontró que el reactivo ninhidrina reaccionó con el grupo alfa-amino libre (al ser sometidos a calor) de los aminoácidos presentes en la leche, la solución de albúmina de huevo diluida, glicina, tirosina, ácido glutámico, arginina, leche muestran complejos coloreados violeta- azuloso en diferentes intensidades la cual es proporcional a la concentración de este aminoácido, indicando de esta forma la presencia de aminoácidos en todas las muestras y obviamente la ausencia en el blanco.

Resultados:

1. Glicina = positivo
2. Tirosina = positivo
3. Acido glutámico= positivo
4. Arginina = positivo
5. Albumina de huevo = positivo
6. Leche = positivo

Reacción Xantoproteica.

En cuatro tubos de ensayo colocamos lo siguiente:

1. 1 ml de glicina.
2. 1 ml de tirosina.
3. 1 ml de solución proteica de albúmina de huevo.
4. 1 ml de leche.

Añadimos a cada tubo 1 ml de ácido nítrico concentrado y luego 1 ml de NaOH al 10% y agitamos la mezcla.

Calentamos los tubos en baño maría y observe la formación de una coloración amarilla que detecta la presencia de aminoácidos aromáticos.

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Observaciones

Se evidenció que inicialmente la coloración para dicha prueba y de igual manera para la confirmación con el NaOH, este cambio se debe a que se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos aromáticos como lo son tirosina, fenilalanina y triptófano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjado en medio fuertemente alcalino (formación de ácido picrámico o trinitrofenol).

Resultados:

1. Glicina = negativo
2. Tirosina = positivo
3. Solución proteica de albumina e huevo = positivo
4. Leche = positivo

Determinación de Azufre.

Colocamos en cuatro tubos de ensayos limpios y secos, lo siguiente:

1. 1 ml de glicina.
2. 1 ml de cisteína.
3. 1 ml de solución proteica de albumina de huevo.
4. 1ml de leche.

Agregamos a cada tubo 1 ml de  NaOH al 25%, calentamos los tubos en baño de agua hirviendo, por 15 minutos.

Enfriamos y añadimos 5 gotas de acetato de plomo al 1% y agitamos.

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Observación.

Sirve para identificar de los aminoacidos azufrados.

Al aplicarle calor estos compuestos con junto con una base fuerte (NaOH), liberan ácido sulfhídrico y se da la formación de una sal la cual al agregar el acetato de plomo forma un precipitado de color negruzco que  nos indica se ha formado sulfuro de plomo, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre. La leche muestra cistina y metionina igualmente el huevo, las cuales presentan azufre, la cisteína es el aminoácido que posee azufre y la glicina solo posee el grupo amino y carboxilo.

Resultados:

1. Glicina = Negativa
2. Cisteína = Positivo
3. Solución proteica de albumina de huevo = Positivo
4. Leche = Positivo

Reacción de Millón (demostrativa).

En cuatro tubos de ensayo colocaron:

1. 1 ml de glicina.
2.  1 ml de tirosina.
3. 1 ml de solución proteica de albúmina de huevo.
4. 1 ml de leche.

Agregaron  a cada tubo 1 ml de reactivo de millón, agite y caliente los tubos en baño de maría. Notamos la formación de un complejo coloreado que va de rosado a ocre.

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Observaciones.

La prueba indica la presencia de tirosina endichas muestras es, ya que esta prueba es  específica para este aminoácido, el cual contiene un anillo de benceno al que se une un grupo hidroxilo. En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico del reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo rojizo.

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