Practica De Espectrofotometro
Enviado por hachacar • 16 de Septiembre de 2014 • 864 Palabras (4 Páginas) • 254 Visitas
PRACTICA DE ESPECTROFOTOMETRO
4° F
INTEGRANTES:
Introducción
La medida de la absorción de la luz por una sustancia en solución es un método
importante en el análisis bioquímico. La cantidad de luz absorbida es proporcional a la
concentración de la sustancia en solución. La absorción varía con la longitud de onda de la luz,
debiendo efectuarse la medida usando luz de longitud de onda de máxima absorción λmax ), que
es característica de cada sustancia. Las sustancias coloreadas tienen una ¬λmax en la región
visible del espectro. Otras sustancias absorben luz de otras regiones del espectro (por ejemplo los
ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta ) y no son detectadas por el ojo humano.
Para conocer la concentración de una sustancia coloreada en solución se podría
comparar visualmente la intensidad de color de dicha solución frente a una o varias soluciones de
concentración conocida. Sin embargo resulta más preciso utilizar un aparato, el
espectrofotómetro, que mide la cantidad de luz que atraviesa una solución.
Ley de Lambert-Beer
La fracción de luz incidente absorbida por una solución a una longitud de onda
determinada es proporcional al espesor de la capa absorbente (paso óptico) y a la concentración
de sustancia absorbente. Estos dos parámetros están combinados en la ley de Lambert-Beer:
log Io/I = εcl
Io: intensidad de la luz incidente.
I: intensidad de la luz transmitida.
ε: coeficiente de absorción molar (en unidades de litros/mol x cm).
c: concentración de la sustancia absorbente (en moles/l).
l: paso óptico de la muestra que absorbe luz (en cm).
La expresión log Io/I se denomina absorbancia y se designa por A. Es una medida de la
cantidad de luz absorbida por la solución. El porcentaje de transmitancia (%T = I/Io x 100) es una
medida la cantidad de luz que atraviesa la solución.
La ley de Lambert-Beer se cumple si la luz incidente es paralela y monocromática y si las
moléculas de soluto y disolvente están orientadas al azar. Con una capa absorbente de paso
óptico fijo la absorbancia es directamente proporcional a la concentración del soluto absorbente.
El coeficiente de absorción molar es una constante física que representa la absorbancia
de una sustancia cuando el espesor de la capa absorbente es 1 cm y la concentración de la
sustancia absorbente es 1 mol/l. El coeficiente de absorción molar varía con la naturaleza del
compuesto absorbente, el disolvente y la longitud de onda de la radiación.
EL ESPECTROFOTÓMETRO
Está compuesto por las siguientes partes:
FUENTE DE ENERGIA: lámpara que emite un haz luminoso que contiene un rango de longitudes
de onda.
MONOCROMADOR: se llama también selector de longitud de onda. Consiste en una red de
difracción que separa las diferentes radiaciones procedentes de la fuente y selecciona la longitud
de onda requerida.
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