Practica Determinacion De Proteinas (Byureth)

INTRODUCCIÓN

La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se

obtiene fundamentalmente a través de la alimentación y se almacena en el

hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de

glucosa en sangre.

El valor de referencia de glucosa en suero o plasma es de 60 – 110 mg/dL. Los

niveles de glucosa en la sangre superiores a los normales pueden ser un signo de

diabetes, hipertiroidismo, cáncer pancreático o pancreatitis. Los niveles de

glucosa en la sangre inferiores a lo normal pueden deberse a hipopituitarismo o

hipotiroidismo.

OBJETIVOS

Determinar la concentración de Glucosa en mg/dL de una muestra extraída de

suero sanguíneo.

MATERIALES Y EQUIPOS

Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm

Centrífuga

Termobaño a 37°C (±0.1°C)

Tubos de ensayo limpios (de preferencia estériles)

Cubetas de 1 cm de paso de luz

Micropipetas

Puntas nuevas estériles

Guantes de látex

Cubre bocas

REACTIVOS

R

Glucosa Cal

MUESTRAS

TRIS pH 7.4

92 mmol/L

Fenol

0.3 mmol/L

Glucosa oxidasa (GOD)

15000 U/L

Peroxidasa (POD)

1000 U/L

4-Aminofenazona

2.6 mmol/L

Patrón primario acuosa de Glucosa a 100 mg/dLSuero o plasma sanguíneo.

PROCEDIMIENTO:

1. Encender el espectrofotómetro (con 30 min de anticipación).

2. Extraer 5ml de sangre.

3. Centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.

4. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar

a 2500 r.p.m. por 3 minutos.

5. Pipetear en una cubeta:

Blanco

Patrón

Muestra

R (mL)

0.5

0.5

0.5

Patrón (μL)

--

5

--

Muestra (μL)

--

--

5

6. Mezclar hasta homogenizar e incubar 10 minutos a 37°C ó 20 minutos a

temperatura ambiente (15-25°C)

7. Leer la absorbencia (A) del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El

color es estable como mínimo 30 minutos.

CÁLCULOS

A Muestra

mg

X 100 Conc. Patrón =

de glucosa en la muestra

A Patrón

dL

Factor de conversión: mg/dL X 0.0555 = mmol/L

CUESTIONARIO:

1. Investigar y describir las reacciones en las que intervienen las enzimas en este

método.

2. Investigar cuales son los parámetros estándar para este método, compararlos

con los obtenidos y realizar una conclusión en base a esto.

3. Investigar la importancia de este estudio en la medicina actual y cuáles son los

problemas que acarrea un desbalance de glucosa en el organismo.

4. Investigar cuales son las interferencias más comunes en este método y

mencionar cada una de ellos.

5. Investigar otro método similar determinación de glucosa y describirlo

...