Práctica Nº 5: Determinación de proteínas Unidad Nº 2 Conceptos básicos del metabolismo

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Escuela Superior Politécnica del Litoral

FACULTAD CIENCIAS DE LA VIDA

BIOQUIMICA (BIOG1006)

Informe Laboratorio #5

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Práctica Nº 5: Determinación de proteínas

Unidad Nº 2 Conceptos básicos del metabolismo

Resultados de Aprendizaje: Aplicar las técnicas analíticas básicas para la identificación de biomoléculas e interpretación de resultados.

1. INTRODUCCIÓN

La cuantificación de proteínas es una técnica que brinda una gran precisión para la obtención de información específica de las proteínas que se desea estudiar, ya sea para diagnósticos, o con fines científicos, se lleva a cabo comúnmente para resaltar las utilidades y limitaciones de la proteína, se lleva a cabo por distintos métodos, ya sea por absorbancia de luz o colorimetría (Bermudez, 2018).

 Para la determinación de la concentración de proteínas en una muestra biológica existen varias técnicas o método y la gran mayoría de ellos se basan 3 aspectos:

• La propiedad intrínseca de las proteínas para poder absorber luz UV.
• La formación de derivados químicos.
• La capacidad de las proteínas para unir ciertos colorantes.

Entre los métodos de cuantificación de proteínas podemos encontrar principalmente los de absorción, los colorimétricos y los fluorimétricos, entre ellos se diferencian notablemente por sus rangos de sensibilidad, en la Tabla podremos notar esto más claramente.

Tabla 1 Métodos de cuantificación de proteínas Fuente: (Salud, 2017)

1. OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL

• Realizar una curva de patrón para la determinación de proteínas y determinar la presencia de proteínas en una muestra problema teórica.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Determinar la concentración (C) de proteínas presente en cada una de las mezclas estudiadas conociendo la concentración del reactivo de Bradford mediante la utilización de un simulador online.
• Obtener los valores prácticos de absorbancia (A) realizando una gráfica A vs C mediante la utilización de recursos digitales y herramientas de Microsoft Excel.

1. MATERIALES:

1. http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm
2. https://web.microsoftstream.com/video/56091ebf-ccd9-4428-a438-9798c9e350a4

1.  Hoja de excel para la elaboración de la curva patrón

1. PROCEDIMIENTO:

1-Ingresar al sitio web http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm,  

Leer detalladamente las instrucciones, realizar la actividad uno para familiarizarse con la práctica, realizar las actividades 1 y 2 referentes a la determinación de proteínas, construir una curva patrón de proteínas leyendo las absorbancias a 595 nm en un rango desde 0 hasta 0,9 mg, a razón de 0,1 mg.

1. RESULTADOS A REPORTAR: 

1- Reportar las gráficas correspondientes a la curva de calibración y los valores obtenidos para la muestra problema según la ecuación de la recta.

Para la Actividad 1 se obtuvieron los siguientes datos:

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Análisis Cuantitativo para la obtención de la Concentración (C):

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CUBETA 1

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CUBETA 2:

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CUBETA 3

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Para la elaboración de la gráfica de la Actividad 1, se obtuvo el siguiente resultado: