Practica plasmidos.
Enviado por anahi777 • 13 de Enero de 2016 • Prácticas o problemas • 741 Palabras (3 Páginas) • 191 Visitas
Resultados y Discusión
El método empleado para la obtención del plásmido de E. coli que se utilizo fue el de "lisis alcalina" que se basa en la desnaturalización y precipitación selectiva del DNA cromosómico, en estas condiciones el DNA plasmídico permanece intacto debido principalmente a su pequeño tamaño y su naturaleza circular y super enrrollada.
Le leyó la muestra en el espectro UV y se obtuvieron los siguientes resultados:
Muestra | Absorbancia a 280 | Absorbancia a 260 |
Plásmidos de E.coli | 0.0101 | 0.0144 |
A partir de estos resultados se calculó la concentración de plásmido obtenidos asi como su pureza y la concentración de proteinas.
Pureza: absorbancia260/absorbancia280
Pureza: 0.0101/0.0144=0.701
Concentración de plásmido: DO260 x 50 (factor de dilución) x 50 (g/ml)
1000
Concentración de plásmido: 0.02525 g/ml
Concentración de proteínas: DO280 x 50 (factor de dilución) x 50 (g/ml)
1000
Concentración de proteínas: 0.036 g/ml
Para poder verificar si se pudo obtener DNA plasmídico y proteínas, se realizó una electroforesis ya que este método permite observar visualizar el ADN plasmídico o fragmentos del mismo en el cual se separan los fragmentos de ADN en función de su tamaño, esta técnica consiste en someter la mezcla de moléculas de ADN en un gel de agarosa a un campo eléctrico y finalmente se observa en transiluminador ya que Al iluminar el gel con luz UV se ven bandas de fluorescencia que corresponden a moléculas de ADN.
El resultado obtenido siguiente:
De acuerdo a los resultados obtenidos la pureza del ADN plasmidico es muy baja ya que de acuerdo con la literatura debe entrar en un rango de 1.8-2.0 y como en nuestro caso es menor al rango antes mencionado indica que hay prescencia de proteínas u otros elementos adsorbentes de UV en la muestra por lo que se tenia que volver a precipitar el ADN para poder obtener la pureza deseada.
En cuanto a la electroforesis, como se muestra en la imagen 1, no se llevo a cabo el corrimiento de la muestra ya que en comparación con la imagen 2 que se observa la presencia de bandas en el gel lo cual indica que hubo corrimiento de la muestra y que hay plasmido en ella, en nuestro gel no hay ninguna banda ya que la muestra se salió de los pozos del gel de poliacrilamida durante el procedimiento a eso se le pueden atribuir distintas causas como son:
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