Práctica 5. “CURACIÓN Y SEGREGACIÓN DE PLÁSMIDOS EN Escherichia coli”
Enviado por Schenckii Mt • 21 de Agosto de 2019 • Informes • 753 Palabras (4 Páginas) • 391 Visitas
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología
Laboratorio de Genética Microbiana.
Práctica 5.
“CURACIÓN Y SEGREGACIÓN DE PLÁSMIDOS EN Escherichia coli”.
Alumnos:
Flores Martínez Miguel Angel
5QV2 Sección: 1 Equipo: 5
Profesores:
INTRODUCCIÓN.
Los plásmidos son elementos genéticos extracromosómicos que se han encontrado esencialmente en todos los tipos de bacterias estudiadas hasta la fecha. Dependiendo de su tamaño pueden codificar desde unas cuantas proteínas hasta cientos de ellas. Sin embargo, raramente codifican productos esenciales para el crecimiento celular, tales como ARN polimerasas o enzimas del ciclo de los ácidos tricarboxílicos. En cambio, los productos de sus genes generalmente dan a las bacterias una ventaja selectiva sólo bajo ciertas condiciones. La resistencia a antibióticos como la ampicilina, tetraciclina y kanamicina; la nodulación de raíces de leguminosas; y la producción de antibióticos como la bacteriocina (activa contra otras especies bacterianas), son algunas características fenotípicas codificadas por los plásmidos. Los plásmidos varían ampliamente en tamaño, desde miles a cientos de miles de pares de bases (un tamaño comparable al cromosoma bacteriano) y son, con mayor frecuencia, moléculas circulares de ADN de doble cadena. Sin embargo, algunas bacterias poseen plásmidos de estructura lineal, la cual no es una característica común en los plásmidos bacterianos por lo que no serán discutidos en esta revisión. Estos elementos juegan un papel crucial en la evolución y adaptación bacterianas, ya que son mediadores del intercambio de material genético entre estas poblaciones. La transferencia de la información genética contenida en el plásmido de una bacteria donadora a una receptora se conoce con el nombre de conjugación. Este proceso requiere de la expresión de genes y de la presencia de regiones en el ADN del plásmido necesarios para su movilización. El plásmido se moviliza a través de un puente de conjugación entre las células.
Los plásmidos se replican de manera autónoma con respecto al cromosoma, ya que codifican elementos propios que controlan su replicación. Algunos plásmidos se replican en pocas especies bacterianas y se dice que poseen un rango de hospederos reducido. Un segundo grupo de plásmidos se replica en un amplio rango de hospederos y se les denomina promiscuos. Existen diversos factores que influyen en la capacidad de los plásmidos para colonizar diferentes hospederos; una replicación eficiente es el paso más crítico y es el resultado de una interacción adecuada entre el plásmido y el hospedero. Esta interacción plásmido hospedero se ha estudiado con detalle debido a las implicaciones básicas y de aplicación biotecnológica que representa. Los primeros estudios sobre la replicación de estos elementos fueron realizados con plásmidos de Escherichia coli como ColE1, pSC101, R6K, R1, RK2 y F, que tienen como una característica común que replican su material genético por el mecanismo tipo theta. Recientemente se ha caracterizado un gran número de plásmidos pequeños (2-15 kb) que se replican por mecanismos diferentes al anterior. Estos son: a) el mecanismo del círculo rodante, originalmente observado en bacteriófagos de ADN de cadena sencilla (ADNcs) de E. coli; b) el mecanismo llamado por desplazamiento de la cadena, cuyos plásmidos representativos son elementos promiscuos asociados a la familia IncQ (plásmidos del grupo de incompatibilidad Q) cuyo prototipo es el plásmido RSF1010 de E. coli. En esta revisión se presenta un análisis de los diversos mecanismos de replicación de los plásmidos bacterianos, y se mencionan las ventajas y desventajas de cada mecanismo con relación a sus posibles aplicaciones biotecnológicas1.
1PEDRO D. LOEZA LARA, JUAN J. VALDEZ ALARCÓN, VICTOR M. BAIZABAL AGUIRRE Y JOEL E. LÓPEZ MEZA (2014) MECANISMOS DE REPLICACIÓN DE LOS PLÁSMIDOS BACTERIANOS URL. www.facmed.unam.mx/publicaciones/ampb/numeros/2004/06/71-78_PEDRO_D.pdf
OBJETIVOS.
- Demostrar la segregación de plásmidos en E. coli
- Demostrar la curación de plásmidos en E. coli
- Comparar la curación de un plásmido grande unicopia con uno pequeño multicopia
RESULTADOS.
Tabla 1. Títulos obtenido de cepas aisladas (testigo y problema) y porcentaje de sobrevivencia.
Equipo | Cepa | Títulos (UFC/ mL) | % Sobrevivencia | |||
10^-4 | 10^-5 | 10^-6 | ||||
E. coli JC4046(Téstigo) | ||||||
E. coli JC4046(Problema) | ||||||
DH5α(Téstigo) | ||||||
DH5α(TProblema) | ||||||
E. coli JC4046(Téstigo) | ||||||
E. coli JC4046(Problema) | ||||||
DH5α(Téstigo) | ||||||
DH5α(TProblema) | ||||||
E. coli JC4046(Téstigo) | ||||||
E. coli JC4046(Problema) | ||||||
DH5α(Téstigo) | ||||||
DH5α(TProblema) | ||||||
Tabla 2. Determinación del porcentaje de segregación para E. coli JC4046
Equipo | Colonias parchadas | Réplica de colonias | % segregación | |
| M. no permisible | |||
Tabla 3. Determinación del porcentaje de curación para E. coli JC4046
Equipo | Colonias parchadas | Réplica de colonias | % curación | |
M. permisible | M. no permisible | |||
Tabla 4. Determinación del porcentaje de segregación para E. coli DH5α PBS
Equipo | Colonias parchadas | Réplica de colonias | % segregación | |
M. permisible | M. no permisible | |||
Tabla 5. Determinación del porcentaje de curación para E. coli DH5α PBS
Equipo | Colonias parchadas | Réplica de colonias | % curación | |
M. permisible | M. no permisible | |||
DISCUSIÓN.
CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFÍA
- Snyder, L.; Champness, W.; Molecular genetics of bacteria. EE.UU. 2007. ASM Press, 3a edición. 735pp. 223-224.
- Spengler, G.; Molnár, A.; Schelz, Z.; Amarai, L.; Sharples, D.; Molnár, J.; The mechanism of plasmid curing bacteria. Hungría, 2006. PMID: 16842214.
...