Procedimiento de conteo

1. Objetivo:

Determinar número de coliformes fecales por conteo.

1. Alcance:

Procedimiento para obtener la cuenta delos organismos fecales en aguas, moluscos, verduras y productos de origen vegetal.

1. fundamento del método:

El conteo de coliformes fecales en los alimentos es una manera para saber el riesgo de contaminación que el alimento posee. Su identificación se basa en la fermentación de la lactosa con formación de gas en medios selectivos incubados a una temperatura estricta. Su empleo como indicador fecal tiene muchas limitaciones, ya que su presencia no puede interpretarse de la misma manera en todos los alimento. Su cuantificación está supeditada a diversas condiciones, entre las cuales destacan su reproducción o destrucción en los diferentes tipos de alimentos. En todos los casos, su hallazgo indica un cierto grado de riesgo, pero no existe correlación absoluta entre presencia y la de microorganismos patógenos entéricos.

1. Revisión del método:

Este método será revisado cada 2 años o cada que la norma sufra cambio o modificación.

1. vocabulario:

1. coliformes fecales: grupo bacteriano presentes en los intestinos de los mamíferos y los suelos, que representan una indicación de la contaminación fecal en el agua.
2. Moluscos: organismo acuático comestible que proviene de agua dulce, salobre o salada, cuerpo blando por una concha compuesta invariablemente por dos valvas, el cual se alimenta por filtración.
3. Agua para uso y consumo humano: agua que no contiene contaminantes objetables, ya sean químicos o agentes infecciosos y que no causa efectos nocivos para la salud. También se denomina como agua potable.
4. Vegetales: son alimentos que proceden de seres vivos que crecen pero no mudan de lugar por impulso voluntario.
5. Alimentos origen vegetal: todo alimento que tenga origen apartir de los vegetales.

1. Materiales y equipos.

todos los materiales de vidrio debe estar estéril .

• Horno para esterilizar con regulador de temperatura.
• Incubadora con regulador  de temperatura y termómetro sensibilizada de ±1°C.
• Autoclave con termómetro y manómetro.
• Baño de agua con regulador de temperatura y termómetro con sensibilididad de ±1°C .
• Licuadora de vasos metálcos con una o dos velocidades.
• Balanza capaz de pesar hasta 2500gr con sensibilidad de 0.1gr.
• Instrumentos para la preparación de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, espátulas.
• Frascos de vidrio de boca ancha de 250 ml con tapón de rosca conteniendo 99 o 90 ml de diluyente y/o tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca conteniendo 9ml de esta disolución. En ambos casos el volumen después de la esterilización sera ±1% del señalado.
• Tubo de cultivo de 20 x 200 mm, de 16 x 150, de 12 x 100 mm ó los mas adecuados para cada caso.
• Gradillas para los tubos anteriores.
• Campanas de fermentación
• Pipetas bacteriológicas de 10 ml graduadas en 0.1ml y de 1 ml graduadas en 0.01ml.
• Asa de platino o nicromel de 3mm de diámetro.

1.  Reactivos y soluciones:

 Los reactivos que aquí se menciopnan son de grado analítico.

• Agua peptonada
• Solución reguladora diluyente.
• Caldo lauril sulfato triptosa
• Caldo lactosa bilis verde brillante.
• Caldo EC.
• Reactivo de kovac.

1. Preparacion de reactivos.

1. agua peptonada

formula:

• peptona                 10gr.
• Cloruro de sodio    5gr.
• Agua                      1L.

Disolver los componentesen un litro de agua, ajustar el pH a 7.2±0.1.distribuir en volúmenes de 3-5 ml. En tubos de 13x 100mm.  Esterilizar a 121grados celcius durante 15 min.

7.1.2 solucion reguladora de fosfatos:

Formula:

• KH2PO4.          (Fosfato ácido de potasio).  34 gr.
• Agua.          500 ml.

• Disolver el fosfato en el agua y ajustar el pH a 7.2  con hidróxido de sodio 1 N.
• Llevar un litro con agua.
• Esterilizar durante 20 min. A 121°C. Conservar en refrigeracion.
•   Tomar 1.25 ml. De solución concentrada y llevar un litro con agua. Esta es la solución de trabajo.
• Distribuir porciones de 99.90 y 9 ml. Según se requiera.
• Esterilizar a 121°C por 20 min.

7.1.3  Caldo lauril sulfato triptosa.

Formula:  

• Triptosa.      20.00gr
• Lactosa.       5.00gr
• Fosfato dibasico de potasio.(K2HPO4)  2.75 gr
• Fosfato ácido de potasio. (KH2PO4)   2.75gr
• Cloruro de sodio.       5.00 ggr
• Lauril sulfato de sodio     0.1gr
• Agua.     1.0L.

Disolver los ingredientes antes mencionados en un litro de agua. Hervir y distribuir volúmenes de 10 ml en tubos de 16 en tubos de 16 x 150 mm  con campana de fermentacióntacion. Esterilizar a 121°C durante 15 min el pH final del medio debe ser de 6.8 ±0.1.

...