Práctica No 1 Determinación de aminoácidos terminales con grupo alfa amino libre

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

PRACTICA No 1

DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE

MENDES MARTINEZ JESSICA NOHEMI  4QV3

INTRODUCCION:

Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos. El primero en lograr esto fue Frederick Sanger, quién diseño un método, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso de DNFB.

El DNFB se utiliza para la determinación en péptidos y proteínas de los aminoácidos con el grupo alfa amino libre, el DNFB se combina con la amina del aminoácido liberándose ácido fluorhídrico y se forma un dinitrofenil aminoácido, esta reacción se puede utilizar para establecer la identidad del amino ácido terminal de una proteína portadora del grupo amino libre y también es muy útil para conocer el número exacto de cadenas que contiene una molécula de proteína puesto que la reacción se produce con grupos amino libre.

 Este compuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionará con los grupos imidazol, fenólicos y epsilonamino, por lo que se dará una dinitrofenilación en la cadena lateral de la tirosina, histidina y lisina. Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una ruptura total de los enlaces peptídicos lo que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace es más difícil de romper. Los DNP de aminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoacidos libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar. Estos DNP son sometidos a cromatografía, y se determina al aminoácido amino terminal de la proteína en comparación con otros DNP derivados.

OBJETIVO:

Emplear el método de Sanger para identificar los aminoácidos que contiene el grupo α-N-terminal de las cadenas de la molécula de la hemoglobina.

METODOLOGIA:

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