DETERMINACIÓN DEL AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE (MÉTODO DE SANGER)
Enviado por gisselleponce • 11 de Octubre de 2017 • Informes • 853 Palabras (4 Páginas) • 464 Visitas
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO Y PARASITÓLOGO
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
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LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA 4: DETERMINACIÓN DEL AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE
(MÉTODO DE SANGER)
- OBJETIVOS
- Identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina mediante el método de Sanger.
- OBJETIVOS PERSONALES
- Mediante diferentes métodos de extracción localizar e identificar los aminoácidos amino terminales
- Con ayuda de los resultados obtenidos prácticamente determinar el Rf (Factor de Retención) de las muestras utilizadas
- RESULTADOS
Tabla 1.- Resultados cromatograma original.
Muestras | Dist. Muestra | Dist. Fase móvil | Rf |
DNP- Ala | 24.4 | 41.5 | 0.587952 |
DNP-Phe | 24.2 | 41.8 | 0.578947 |
DNP-Val | 29.2 | 43 | 0.67907 |
DNFB | 18.7 | 44 | 0.425 |
Problema 1 | 18.1 | 45 | 0.402222 |
Problema 2 | 28.8 | 45 | 0.64 |
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- DISCUSIÓN
Al comenzar la dinitrofenilación, se utiliza la proteína hemoglobina ya que se conoce bibliográficamente su estructura y composición de aminoácidos, esto nos lleva a saber que su alfa amino o grupo amino libre pertenece al aminoácido Valina.
Se realiza este procedimiento en agitación constante con pH alcalino debido a que en este pH el grupo amino se encuentra desprotonado, lo cual hace posible un ataque nucleofílico del compuesto del DNFB.
La formación de un compuesto cuyo color es amarillo-verdoso nos indica la dinitrofenilación completa.
Se acidifica la solución con HCl 3N esto para reducir el pH < 3, esto último debido a que un medio ácido es esencial para la ruptura de los enlaces peptídicos y propone un medio apto para realizar la hidrolisis.
Se realizan diversos lavados con éter debido a que este solvente tiene un punto de evaporación bajo lo que lo hace muy volátil y económico, se trata de un solvente no polar y permite la separación de las fases. Se realizan diversos lavados para aumentar la eficiencia de separación de fases. El éter es eliminado en baño maría.
Se re suspende la pastilla con ácido y se hidroliza durante 3 horas a 15lb de presión.
El hidrolizado contendrá residuos de aminoácidos insolubles en agua (residuos dinitrofenilados) y algunos solubles en agua (residuos contaminantes), se extrae con éter el aminoácido dinitrofenilado, color amarillo pálido.
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