“Purificación y caracterización de gonadotropina coriónica humana para uso diagnóstico”

Dar lectura al artículo denominado “Purificación y caracterización de gonadotropina coriónica humana para uso diagnóstico” y describir cada uno de los pasos del proceso analítico que a continuación se presentan.

•Definir el problema

La obtención de la hormona gonadotropina coriónica humana, esto ayudará a tener un diagnóstico temprano en mujeres embarazadas para evaluar algunos riesgos como la enfermedad del síndrome de down la trofoblastina y otros tipos de cáncer, esta experimento se realiza con el fín de hacer un diagnóstico de calidad para las mujeres embarazadas para detectar los casos aproximadamente del 90% .

•Seleccionar un método

se detérmino con concentraciones de gonadotropina coriónica humana para obtener  y purificarlo a partir de las orinas de las embarazadas y secado mediante la precipitación con sulfato de amonio y de cromatografía de afinidadprevia purificada de anticuerpos monoclonales anti cadenas beta, mediante método cuantitativo el cual por varias etapas: la clasificación la capturadonde, la hcg obtenida se caracteriza mediante PAGE-SDS

•Obtener la muestra

La muestra sería la orina de embarazadas que tengan entre 5 y 11 semanas de gestación.

•Preparar la muestra

Clarificación de la orina: se realizó por filtración a través de papel de filtración rápida Whatman grado 4:20-25 μm (Whatman plc, Reino Unido), a una temperatura de 22 ° ± 2 °C. Precipitación de la hCG: en la etapa de captura se empleó la precipitación con sulfato de amonio calidad analítica (Merck, Alemania).

muestra de 10 litros de orina ser añadió sulfato amonio bajo agitación constante hasta alcanzar 10 20 30 40 50 60 y 80 de saturación todas las aliteraciones agitada durante 30 minutos y luego se dejaron una hora en reposo, se realizó a 22 grados centígrados posteriormente las muestras se centrifugaron durante 15 minutos, la hcg se obtuvo a partir de la fracción precipitada con el sulfato de amonio de purificación por cromatografía de inmunoafinidad con el anticuerpo monoclonal murino 4G1C5 DE ISÓTOPOS IgG1 especificada para cada cadena beta, el AcM anti-β hCG se purificó a partir de líquido ascítico(conservado a -20ºC)por cromatografía de afinidad con Proteína A-Sepharose CL 4B (Amersham-Pharmacia, Suecia). (15) El líquido ascítico se diluyó 1:2 con la disolución reguladora de acoplamiento (NaCl 3 mol/L, glicina 1,5 mol/L pH 8,9) y se aplicó a una columna XK16/20 (16 x 20 cm) empaquetada con Proteína A Sepharose CL 4B y volumen de lecho 12,7 mL, equilibrada previamente con esa misma disolución. Después la columna se lavó con la disolución reguladora de acoplamiento hasta que la densidad óptica (DO) a 280 nm hasta que se alcanzó la línea base del cromatograma. Posteriormente se eluyó la IgG1 enlazada con la disolución reguladora ácido cítrico 0,1 mol/L pH 6. A continuación la matriz se regeneró con la disolución reguladora ácido cítrico 0,1 mol/L pH 3 y se equilibró con PBS. El pico de AcM obtenido se dializó a 4ºC frente a la disolución reguladora PBS, utilizando una membrana Spectra/Por®(Spectrum Laboratories, USA) con un tamaño de poro de 12-14 kDa, con tres cambios de 1 L cada 8 h. La velocidad de agitación durante la diálisis fue de 200 min-1

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