Que Es PCR

QUE ES PCR? Es un método in vitro de síntesis de ADN con el que un segmento de este es específicamente ampliado al ser delimitado por un par de cebadores o iniciadores que lo flaquean.

Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN.

 ¿COMO SE Realiza EL PCR? Desnaturalización

 Alineamiento/Unión del cebador

 Extensión/Elongación de la cadena

 Elongación Final

 Conservación

Que se utiliza para realizar un PCR

ADN molde

 Desoxirribonucleosidos trifosfatados

 Cebadores o iniciadores

 Enzima (polimerasas)

 Tampón de reacción para polimerasa

 Agua

 Termociclador

Desnaturalización

Primero, la fusión separa las dos cadenas de DNA a alta temperatura (~100°C).

alineamiento/unión del cebador: Los cebadores “primers” previamente diseñados, reaccionan con la hebra sencilla de DNA y se pegan en lugares específicos por complementariedad de bases.

extensión/elongación de la cadena:

gracias a la acción de una enzima polimerasa.

la repetición de los ciclos permite multiplicar geométricamente los tramos de ADN elegidos

 PCR Convencional

 PCR de tiempo real

 PCR anidada

 PCR in situ

 PCR Multiplex

 PCR en Transcriptasa reversa (RT-PCR)

Pcr convencional

La PCR es un método rápido de amplificación in vitro de secuencias de ADN específicas dentro de una muestra. Habitualmente la reacción se diseña para permitir la amplificación selectiva de una o varias secuencias diana de ADN presente en una mezcla compleja de secuencias.

aplicaciones

• Detección por PCR de agentes infecciosos como los virus de la hepatitis B y C, del papiloma y del sida.

• Detecta microorganismos patógenos como las clamidias, las micobacterias que causan tuberculosis, los Heliobacter causantes de gastritis y los tripanosomas responsables de la enfermedad de Chagas.

VENTAJAS

• Especificidad

• Sensibilidad

• Rapidez

DESVENTAJAS

• Cuantificación difícil

• tratamientos de post pcr en geles

• Peligro de contaminación

• PCR de tiempo real

• La PCR en tiempo real o PCR cuantitativa permite cuantificar además de detectar y amplificar secuencias de ADN.

aplicaciones

• Determinación agentes patógenos

• „Expresión génica en tejido en diferentes

estadios de la enfermedad o tras tratamiento

• „Deleción o amplificación de genes

• „Diagnóstico clínico de tumores

VENTAJAS

 Cuantificación viral

 Cuantificación de la expresión génica

 Medición del daño del ADN

 El control de calidad y validación de ensayo

La detección de patógenos

DESVENTAJAS

• Laborioso y dificultoso

• Determinación de genes

presuntos constitutivos

• Alta sensibilidad

PCR anidada

 Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es utilizado como molde para realizar una segunda amplificación con cebadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es muy específica.

 APLICACIONES

 Estudio de los genes

 Detención del virus

 Detención de microorganismos que pueden estar en escasa cantidad en la sangre y en los tejidos

 Detección de un amplio espectro

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