Salmonella Ensayo

Placas Petrifilm: Son medios de cultivo en formato listo para la muestra, constituidas de adhesivos, films  y  nutrientes, para realizar Pruebas Microbiológicas Rápidas

Autoclave: Es dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor a alta presión y temperatura. Funciona permitiendo la generación de vapor pero impidiendo su salida hasta obtener una presión interna de 103 kPa., lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121°C. El tiempo de esterilización a esta temperatura y presión es de 15 – 20 minutos, actúa coagulando las proteínas de los microorganismos.

Esterilización: es el proceso de eliminación de toda forma de vida, incluidas las endoesporas, sean patógenos o saprofitos y que se hallen contenidos tanto en tejidos como en objetos.

Incubadora: Equipo que sirve para incubar medios de cultivos a temperatura adecuada, especialmente siembras bacterianas. Brinda una temperatura absoluta uniforme dentro de la cámara, favoreciendo el desarrollo y cultivo de microorganismos.

Mechero de alcohol: Es un equipo que sirve para proporcionar calor directo con un pequeño ambiente esterilizado. A base de alcohol. Se lo usa en el momento de la siembra para crear un pequeño campo libre de contaminación

1 Preparación y Toma de muestra

1. Coloque en una funda esterilizada una gasa estéril con 10 mL de agua peptonada esterilizada.

1.2 Retire el exceso del medio de la gasa utilizando guantes y realice el hisopado en el equipo y/o superficie a analizar (hisopar una superficie de alrededor 10 cm2).

1.3 Agregue una cantidad apropiada del Suplemento para Enriquecimiento de Salmonella (90 mL) más el Enriquecimiento Base para Salmonella (2.04 mL)  a la funda de la muestra.

1.5 Mezcle y homogenice la muestra. Incube las muestras enriquecidas a 41,5° ± 1 °C durante 18 a 24 horas.

2 Procedimiento de Hidratación

2.1 Coloque la Placa Petrifilm en una superficie plana y nivelada. Levante la lámina semitransparente superior. Realice por duplicado la muestra.

2.2 Pipetee 2 mL de agua, colóquela en el centro de la película cuadriculada inferior, con la pipeta perpendicular a la Placa Petrifilm.

2.4 Deje caer suavemente la película superior sobre el diluyente para evitar atrapar burbujas de aire.

2.5 Coloque el difusor plano en el centro de la placa. Presione ligeramente el centro del difusor para distribuir el diluyente de manera uniforme. Distribuya el diluyente en toda el área de desarrollo de la Placa Petrifilm SALX antes de que se forme el gel. No deslice el difusor a través de la película.

2.6 Coloque la Placa Petrifilm SALX en una superficie plana durante al menos 1 hora a temperatura ambiente (20–25 °C), protegida de la luz, para que se forme el gel.

3 Inoculación, Incubación e Interpretación de la Placa.

3.1 Para las muestras con niveles bajos de contaminación microbiológica, use un asa estéril de 10 µL y retire el volumen completo de muestra a fin de sembrar por estriado en la placa. Utilice un asa suave.

3.2 Realice una sola siembra por estriado, desde la parte superior hasta la parte inferior de la placa, para obtener colonias aisladas.

3.3 Baje la película superior para cerrar la Placa Petrifilm SALX. Asegúrese de que usa guantes (emplear las buenas prácticas de laboratorio para evitar contaminación cruzada o el contacto directo con la placa), aplicar un movimiento suave de presión constante sobre la película superior para retirar todas las burbujas de aire del área de inoculación.

3.4 Incube las placas a 41,5°C ± 1 °C durante 24 ± 2 horas en posición horizontal con el lado coloreado hacia arriba en pilas de no más de 20 placas.

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