TEST DE MICRONÚCLEOS EN CÉLULAS DE MUCOSA BUCAL

TEST DE MICRONÚCLEOS EN CÉLULAS DE MUCOSA BUCAL  

Mendoza Arrieta Angie, Meneses Orosco Cristian

Universidad de la Guajira Facultad de Ciencias Básicas y Aplicadas Programa Biología

INTRODUCCION

Los micronúcleos (MN) son fragmentos de cromosomas o cromosomas completos que se forman durante la transición de metafase – anafase en mitosis y pueden ser cromosomas completos rezagados debido a un daño al uso mitótico (efecto aneuploidógeno) o bien fragmentos de cromosomas sin centrómero (daño clastogénico). En ambos casos, no lograron incorporarse al núcleo de las células hijas pudiéndose diferenciar unos de otros por el tamaño de los MN o la presencia del centrómero o cinetócoro. Los MN pueden ser generados a través de diferentes procesos, es decir, rompimiento y/o pérdida del cromosoma y este daño puede ocurrir debido a excesiva exposición a agentes que dañan el cromosoma, defectos en la mitosis y/o defectos en la reparación del DNA (Schmid, 1975).

La prueba puede ser aplicada en cultivo o in vivo en cualquier tejido que se divida (Bonassi, et al., 2011) por ejemplo en eritrocitos (Zúñiga-González, et al., 2001), linfocitos (Bonassi, et al., 2007) y células epiteliales (Holland, et al., 2008), con el objetivo de detectar daño al genoma. La utilización de la prueba de MN en años

recientes se ha incrementado exponencialmente, esto se debe a diversos factores como la relativa sencillez de la  prueba, el que la obtención de la muestra es mínimamente invasiva y a su bajo costo, todo esto sumado a la amplia evidencia que asocia la frecuencia de MN con exposición medioambiental y ocupacional a agentes genotóxicos, estilos de vida, factores genéticos, cáncer y con otras   enfermedades crónico-degenerativas (Bonassi, et al. 2007).

OBJETIVOS

• Aplicar el test de micronúcleos  a células de mucosa bucal de personas no expuestas a sustancias no genotóxicas.
• Identificar diferentes tipos de micronúcleos en células humanas   obtenidas de mucosa bucal.
• Conocer el fundamento del test de micronúcleos, extrapolando su utilidad a cualquier grupo de organismos expuestos.

MARCO TEÓRICO

Las Células micronucleadas (MN) son fragmentos de cromosomas o cromosomas completos que se caracterizan por ser redondos por su propia membrana, su diámetro varía desde 0.4 a 1.6 micras.  Se encuentran en diferentes tipos de células y las más utilizadas para su análisis son las células de la mucosa bucal, células sanguíneas como los eritrocitos, linfocitos entre otros. Su formación se basa en que en la anafase cualquier fragmento cromosómico que no posea centrómero no podrá integrarse a un núcleo por carecer del elemento indispensable para orientarse en el huso acromático (Zúñiga et al. 2002). Después de la telofase, los cromosomas normales, así como los fragmentos que posean centrómeros, dan origen a los núcleos de las células hijas,  sin embargo, los elementos rezagados que pueden ser fragmentos o cromosomas completos  quedan incluidos en el citoplasma de las células hijas.

Pruebas de Micronucleos.

Para la realización de las pruebas de micronucleos es indispensable utilizar un tejido en constante división, pero debe considerarse que en las células con poco citoplasma los micronúcleos no son fácilmente distinguibles de los lóbulos o proyecciones del núcleo normal. La prueba se realiza en diferentes tipos celulares: eritrocitos policromáticos, cultivos de linfocitos de sangre periférica, eritrocitos jóvenes y maduros de la sangre periférica, queratinocitos, células de la mucosa bucal, hepatocitos de rata, células germinales y células de descamación de la vagina de la rata, entre otros (Guillermo et al. 2006)

Conteo y tinción de los micronucleos.

El conteo de los MN, se lleva a cabo fácilmente en cualquier tejido que se divida como en el epitelio de mucosa oral (Bonassi et al. 2007). Específicamente los MN observados en células exfoliadas de tejido epitelial se forman en las células de la capa basal que es donde se lleva a cabo la división celular, esta migran a la superficie en el transcurso de 5 a 14 días, de tal manera que el monitoreo de poblaciones en este tejido puede reflejar el daño ocurrido durante este tiempo, la muestra se toma mediante un raspado de mucosa, se hace el extendido en portaobjetos perfectamente limpios, se fijan en etanol al 80%, se tiñen con colorantes básicos o específicos para ADN (Holland et al., 2008; Nersesyan et al., 2006) y se analizan entre 500 a 4000 células (Ceppi et al. 2011), en las que se registran los MN encontrados.

Identificación de anormalidades nucleares (AN) en células exfoliadas de mucosa oral

Además de los MN en células exfoliadas Tolbert et al. (1991), describen otras anormalidades (AN), las que además de ser fenómenos que podrían ocurrir en procesos normales de diferenciación celular, son indicadores de daño al ADN, citotoxicidad y muerte celular; ya que las alteraciones más sugestivas en la morfología de las células neoplásicas se producen en el núcleo, donde las modificaciones son en el tamaño, densidad y distribución de la cromatina; estas anormalidades se pueden distinguir de células normales por sus alteraciones ya sea en el citoplasma o en la morfología del núcleo, entre ellas se encuentran la cromatina condensada, cariorrexis, núcleo picnótico, cariolisis, núcleo lobulado también llamado prolongación nuclear y la presencia de células con dos núcleos, llamadas células binucleadas (Fig 1 y 2).

[pic 1]

Fig.1. a) Células Normales, b) núcleo normal, c). Célula micronúcleada d). Célula binucleada, e). Cariorrexis  f). Cromatina condensada.

[pic 2]

Fig. 2. g-h). Núcleo lobulado típico; Núcleo lobulado, i). Núcleo picnotico; j). Cariolisis.

El mecanismo de formación o su significado biológico de cada una de estas AN no está muy bien esclarecido, sin embargo, bajo condiciones patológicas (obesidad,  artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, diferentes tipos de cáncer, problemas hematológicos como: linfoma Inmunoblástico, leucemia aguda megaloblástica, granulocítica crónica, linfocitica aguda; anemia linfocítica trombocitopénica; mieloma múltiple; entre otras) (Torres et al, 2009) o de exposición (tabaco, alcohol, drogas y quimioterapia antineoplásica); se observan altas frecuencias de células con AN.

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