Tecnicas Generales En El Laboratorio

TEMA: “TÉCNICAS GENERALES DE LABORATORIO”

1. OBJETIVO:

Al finalizar la práctica l@s estudiantes estarán en capacidad de:

 Manejar con destreza las técnicas generales para el cuidado de los materiales y equipos de uso continuo en el laboratorio de microbiología...

2. INTRODUCCION:

El correcto manejo y cuidados de materiales y equipos existentes en el laboratorio permitirán al estudiante desarrollar y aprender las diversas técnicas utilizadas en el campo de la microbiología y ampliar sus conocimientos teóricos.

2.1. ESTERILIZACIÓN:

La esterilización es el proceso de conseguir la esterilidad, en la que no existen grados; un objeto, superficie o sustancia es, o no es, estéril. Si es estéril no contiene organismos viables o células presentes y si se le protege contra la contaminación, la condición estéril permanecerá indefinidamente.

La esterilización es el procedimiento por el cual se destruyen o eliminan completamente todos los microorganismos inclusive sus esporas. Estos al ser tratados por procesos de esterilización son incapaces de reproducirse. Se considera que un microorganismo está muerto o totalmente destruido cuando es incapaz de multiplicarse, al ponerlo en condiciones adecuadas de cultivo y desarrollo.

La elección del método depende de la naturaleza física del material que va a ser esterilizado y de la razón para hacerlo. Los procedimientos de esterilización son aplicados para:

• permitir la utilización segura de los productos,

• evitar contaminación ambiental

• impedir el deterioro de un producto.

La esterilización se lleva a cabo o bien eliminando los organismos viables, como en la filtración, o matándolos de una de las siguientes formas:

• calentando en presencia o ausencia de agua,

• irradiando con radiaciones ultravioleta, gamma o rayos X

• tratando con productos químicos en solución o en forma gaseosa.

La elección del agente depende de las circunstancias, servicios existentes, naturaleza del material o equipo que ha de ser esterilizado, y costo.

Las esporas bacterianas son las células vivas conocidas más resistentes al calor y la esterilización debe ser capaz de eliminar las esporas más resistentes de las especies más resistentes. Se ha descrito que las esporas de las bacterias termófilas sobreviven el vapor de agua a presión (200 kPa o 30 psi) a 134 °C durante entre 1 y 10 minutos, y el calor seco a 180 °C durante al menos 15 minutos. La resistencia de las esporas individuales dentro de una población varía, y cuanto mayor sea la población, mayor es el número de esporas individuales más resistentes. La resistencia de las esporas será afectada también por las condiciones de esporulación, condiciones de almacenamiento y edad, así como por las condiciones durante y después del calentamiento.

2.2. DESINFECCIÓN:

. La desinfección implica que el material ha sido tratado a fin de eliminar o reducir el riesgo de organismos patógenos, pero no implica que todos los organismos viables hayan sido inactivados

Es un proceso mediante el cual se destruye los microorganismos que se encuentran en estado vegetativo. El proceso de desinfección se aplica estrictamente a la destrucción de microorganismos, sobre objetos inanimados.

Según la FDA, desinfectantes son «aquellas sustancias químicas capaces de destruir en 10 a 15 minutos los gérmenes depositados sobre un material inerte o vivo, alterando lo menos posible el sustrato donde residen y abarcando en aquella destrucción todas las formas vegetativas de las bacterias, hongos y virus (excepto el de la hepatitis)». En la práctica, los desinfectantes son potentes microbicidas, pero hasta cierto punto tóxico o irritante para los tejidos vivos, por lo que se aplican en superficies, ambientes u objetos contaminados.

2.3. ASEPSIA:

Es un proceso mediante el cual se destruye los microorganismos patógenos que se encuentran en estado vegetativo. El proceso de antisepsia se aplica estrictamente a la destrucción de microorganismos, sobre superficies vivos, con el objeto de prevenir, eliminar o limitar una infección.

También se lo puede definir como un proceso para evitar la sepsis, entendiéndose este concepto como la degradación de los tejidos vivos por la acción de microorganismos patógenos.

El término antiséptico se usa para indicar la sustancia que se opone a la existencia o desarrollo de gérmenes sobre la piel o mucosas, heridas, abrasiones, etc. Su objetivo es esencialmente prevenir la multiplicación de microorganismos patógenos.

2.4 MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN:

La esterilización puede ser efectuada por uno de los métodos descritos a continuación. En general, se recomienda:

• Esterilización con vapor de agua a saturación: siendo las condiciones de referencia el calentamiento a 121 °C durante 15 min. Otras combinaciones de temperatura y de tiempo pueden ser utilizadas a condición de que se demuestre su eficacia.

Es un método que logra esterilización, en el que se utiliza vapor de agua con presión que deshidrata las células microbianas y logra su muerte; se utiliza un autoclave a 15 psi (1,01 at.), 121C por un tiempo de 15 a 20 minutos, dependiendo de la carga de material. Se utiliza para material de vidrio y medios de cultivo principalmente.

• Esterilización por calor seco Es un método que puede lograr esterilización dependiendo de las condiciones a las que se utilice. Las estufas de aire caliente esterilizan por oxidación de las proteínas. El calentamiento puede ser de gas o electricidad. Se precisan temperatura entre 160 - 180°C. durante 2 horas; se pueden manejar combinaciones, como por ejemplo:

• 180° C durante

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