Tesis
Enviado por Jack Andres Rincon • 28 de Septiembre de 2015 • Documentos de Investigación • 917 Palabras (4 Páginas) • 193 Visitas
Medio de cultivo
El medio de cultivo utilizado fue el medio Schenk & Hildebrandt modificado, cambiando el compuesto NH4H2PO4 por los compuestos NH4NO3 y Ca (H2PO4) * H2O.
Tabla 1. Medio de cultivo SH modificado
Compuesto | mg/L |
Nitrato de potasio | 2500 |
Fosfato monobásico de amonio | 300 |
Cloruro de calcio * 2H2O | 200 |
Sulfato de magnesio | 195.34 |
Sulfato de manganeso * H2O | 10 |
Ácido bórico | 5 |
Yoduro de potasio | 1 |
Molibdato de sodio * 2H2O | 0.10 |
Sulfato de zinc * 7H2O | 1 |
Sulfato de cobre * 5H2O | 0.20 |
Cloruro de cobalto * 6H2O | 0.10 |
Sulfato ferroso * 7H2O | 15 |
EDTA * 2H2O | 20 |
myo - Inosito | 1000 |
Tiamina | 5 |
Piridoxina | 0.5 |
Ácido nicotínico | 5 |
Análisis de respuesta del explante
Medio control
Se realizó la siembra de explantes del mesocarpio del fruto de T. peruviana en medio de cultivo SH (Tabla 1) modificándolo cambiándole el compuesto fosfato monobásico de amonio por los compuestos nitrato de amonio (0.18 g/L) y fosfato monobásico de calcio (0.66 g/L) y sin reguladores de crecimiento siendo este el tratamiento 1 el tratamiento control para inducir callogénesis. Se sembraron 15 unidades (frascos magentas) conteniendo entre 3 y 4 explantes de aproximadamente 1 cm2, se observó que en el tiempo entre la escisión de los explantes y mientras se introducían al medio de cultivo sufrían una oxidación, de las 15 unidades que fueron sembradas, 2 unidades se contaminaron posiblemente por una bacteria y el resto de unidades no se obtuvo ninguna respuesta en formación de callos y se logró observar una oxidación progresiva (Figura 1) o necrosis por parte de los explantes (Figura 2).
[pic 1]
Figura 1. Explantes de T. peruviana oxidados sembrados en el medio SH modificado sin reguladores de crecimiento
[pic 2]
Figura 2. Aspectos de los explantes necrosados de T. peruviana sembrados en medio SH modificado sin reguladores de crecimiento
Tabla 2. Resultados tratamiento 1
Unidades introducidas | Oxidación | Necrosis | Contaminación | Unidades disponibles |
15 | 13 | 13 | 2 | 0 |
Tratamiento 2
Este tratamiento se usó el medio SH (Tabla 1) modificándolo cambiando el compuesto fosfato monobásico de amonio por los compuestos nitrato de amonio (0.18 g/L) y fosfato monobásico de calcio (0.66 g/L) además suplementado con reguladores de crecimiento ácido 2,4-diclorofenoxiacetico (2,4-D) 2 mg/L y cinetina (KIN) 0.5 mg/L (Arias, 2013), sembrando 20 unidades (frascos magentas) conteniendo entre 3 y 4 explantes de aproximadamente 1 cm2, se observó a los 5 días transcurridos de la siembra contaminación en 15 unidades, esto pudo ser debido a no dejar suficiente tiempo la luz UV en la cabina de flujo laminar o no dejar suficiente tiempo sumergidos los explantes en los desinfectantes, por otra parte se observó muy poca oxidación y necrosis en los explantes que sobrevivieron y se logró observar una respuesta en callogénesis al transcurrir las semanas (Figura 3 y Figura 4).
[pic 3]
Figura 3. Explantes de T. peruviana después de 1 semana de ser sembrados en medio SH modificado suplementado con (2,4-D) y (KIN)
[pic 4][pic 5][pic 6][pic 7]
Figura 4. Explantes de T. peruviana después de 2 semanas de ser sembrados en medio SH modificado suplementado con (2,4-D) y (KIN)
Tabla 3. Resultados tratamiento 2
Unidades introducidas | Oxidación | Necrosis | Contaminación | Unidades disponibles |
20 | 0 | 0 | 15 | 5 |
Tratamiento 3
Este tratamiento se usó el medio SH modificado modificándolo cambiando el compuesto fosfato monobásico de amonio por los compuestos nitrato de amonio (0.18 g/L) fosfato de potasio (0.354 g/L) además suplementado con reguladores de crecimiento ácido 2,4-diclorofenoxiacetico (2,4-D) 2mg/L y cinetina (KIN) 0.5 mg/L (Arias, 2013), sembrando 20 unidades (frascos magentas) conteniendo entre 3 y 4 explantes de aproximadamente 1 cm2, los resultados se presentan más adelante (Tabla 4).
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