Tipificación De Grupo Sanguineo

TIPIFICACION DE GRUPO SANGUINEO Y FACTOR RH

1. CONNOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO

Los eritrocitos expresan antígenos de membrana. Dichos antígenos se encuentran determinados genéticamente y pueden ser identificados mediante el empleo de anticuerpos específicos de tal manera que se clasifique éstos grupos por diferentes glucolípidos y/o proteínas que forman parte de la membrana de los hematíes y se diferencian por su distinta capacidad antigénica. Las glicoproteínas se hallan unidas a diferentes azúcares, en los cuales reside la especificidad del grupo (grupos A, B, O y Lewis). En otros casos la especificidad está determinada por la estructura primaria de la proteína (grupo M y N).

Los antígenos de los sistemas de grupo eritocitario se definen mediante reacciones de tipo antígeno-anticuerpo o éste último llamado también antisuero, produciendose o no una aglutinación, la cual es el fundamento de la técnica general de tipificación. Los anticuerpos pueden ser naturales, como en el caso de las aglutininas anti A y anti B o inmunes, cuyo ejemplo más característico es el anticuerpo anti Rh.

Éste factor Rh es una proteína integral de la membrana aglutinógena que se encuentra en los glóbulos rojos. Son Rh positivas aquellas personas que presentan dicha proteína en sus eritrocitos y Rh negativa quienes no presenten la proteína. Un 85% de la población tiene en esa proteína una estructura dominante, que corresponde a una determinada secuencia de aminoácidos que en lenguaje común son denominados habitualmente Rh+. Alrededor de la sexta semana de gestación, el antígeno Rh comienza a ser expresado en los glóbulos rojos humanos.

El principal antígeno Rh es el D y el anticuerpo presente en quienes carecen de antígeno D es el anti-D. Si el antígeno D está presente el fenotipo es Rh positivo y si D está ausente es Rh negativo.

También se puede determinar el grupo sanguíneo mediante el gradiente de densidad.

Es un sistema que se suele realizar empleando la ultracentrífuga. Consiste en la separación de las partículas en función de su densidad de flotación. Al centrifugar cada componente se desplazará hacia arriba o hacia abajo hasta que alcance una posición en la que su densidad sea igual a la de su entorno (situación de flotabilidad neutra) y ya no se desplazará más. Como consecuencia se producirán una serie de bandas discretas, las más próximas al fondo del tubo contendrán las partículas con mayor densidad de flotación. Este método también se conoce como equilibrio en gradiente de densidad.

Esta técnica en general, se emplea para separar partículas similares en tamaño pero distintas en densidad. Puesto que la mayoría de componentes eritrocitarios poseen casi la misma densidad, este método no se suele utilizar para su separación. Sin embargo, en situaciones donde intervienen diferentes densidades, la centrifugación isopícnica es el método adecuado.

En las siguientes imágenes se expresa la lectura por medio de aglutinaciones de los diferentes grupos sanguíneos, además de la gráfica de los distintos antígenos presentes o ausentes en la membrana del eritrocito.

La visualización de aglutinación indica una reacción positiva

Aglutinación = Rh positivo (+)

No Aglutinación = Rh negativo (-)

Aglutinación con el antisuero A = grupo sanguíneo A

Aglutinación con el antisuero A y B = grupo sanguíneo “A B”

Ausencia de aglutinación en A y B = grupo sanguíneo “O”

2. OBJETIVOS:

2.1. Objetivo General.-

• Realizar la determinación del grupo sanguíneo y factor Rh.

2.1. Objetivos Específicos.-

• Determinar cuál es el fundamento de la tipificación del grupo sanguíneo y factor Rh.

• Identificar las características estructurales de los grupos sanguíneos.

3. MATERIALES, REACTIVOS EN GENERAL:

• Porta objetos

• Varillas de plástico

• Reloj

• Centrifugadora

• Portaobjetos

• Micropipetas

• Antisuero A

• Antisuero B

• Antisuero D

• Muestra

4. PROCEDIMIENTO:

TIPIFICACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR Rh.

 Colocar tres gotas de sangre (una en cada extremo del portaobjeto y una al centro).

 Adicionar a cada una el antisuero correspondiente (una gota).

 Mezclar con varilla o palillo de sangre con su respectivo antisuero.

 Rorar suavemente por dos minutos.

LAVADO DE ERITROCITOS

 Se toma 200 μl de muestra (sangre total del paciente) y se le agrega 4,5 ml de solución fisiológica.

 Se procede a homogenizar por inversión.

 Se centrifuga 30 segundos a 100 rpm.

 Se forma en el tubo un hilo de eritrocitos.

 Se realiza la decantación de la solución fisiológica del otro extremo del tubo.

 Se realiza esta operación tres veces.

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