Sepoaracion De Muestra Por Gradiente Celular

CONTENIDO

1. RESUMEN 3

2. INTRODUCCION 3

3. OBJETIVOS 4

3.1 OBJETIVO GENERAL: 4

3 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 4

4. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA 4

4.1CENTRIFUGACION POR GRADIENTE DE DENSIDAD 4

4.2 LA SACAROSA 4

4.3 PLASMA 5

4.4 ROJO DE METILO. 5

5. MATERIALES Y METODOS 5

5.3 OBTENCION DE LA MUESTRA. 7

5.4 PROCESO DE LA MUESTRA PARA OBSERVARLA EN EL MICROSCOPIO 9

5.5 OBSERVACION EN EL MICROSCOPIO 10

6. RESULTADOS Y DISCUSIONES 10

DISCUSIONES 11

7. CONCLUSIONES 11

8. BIBLIOGRAFIA 11

1. RESUMEN

La consecuente práctica que se realizo fue para observar la separación de muestras celulares por gradientes de densidad.

Para la práctica se llevó un tubo de tapa lila que contiene coagulante EDTA para mantener los elementos formes de la sangre en buen estado para su uso

Primero se coloca en la centrifugar a 3000 revoluciones por minuto durante 10 minutos para separar los elementos de la sangre y poder extraer los linfocitos.

Se pesa en la balanza la sacarosa (azúcar de mesa) la cantidad de 200 gr y se coloca en una cantidad de 200 ml de agua destilada que esta se colocó en el vaso de precipitación y se mescla con el agitador hasta obtener una solución sobresaturada de glucosa

Luego de la centrifugación se toma con la pipeta de 500 ul el baficof que es una capa de glóbulos blancas esta capa se extrae en un tubo de ensayo. Separando el plasma, los glóbulos blancos y los glóbulos rojos

Se coloca en 3 tubos de polipropileno 3 capas de diferente densidad para la cual se debe hacer un cálculo, en el primer tubo se coloca 200 ul de solución saturada y 800 ul de agua destilada, en el segundo se coloca 400 ul de solución saturada y 600 ul de agua destilada, en el tercer tuvo se coloca 600 ul de solución saturada y 400 ul de agua destilada.

Después se coge 1000 ul de agua y se coloca en el tubo de ensayo desde la mayor concentración hasta la menor. Y se coloca en esta muestra 100 ul de sangre y esta muestra se pone a centrifugar durante 3 minutos.

El porta objetos se rotula dependiendo a la cantidad que haya realizado por ejemplo se realizó de 20, 40, 60. Esta muestra se coloca una gota en el porta objetos y se cube con una gota de rojo de metilo.

Por último se realiza la observación en el microscopio.

2. INTRODUCCION

Esta práctica se realizó para poder entender de mejor manera la separación de las diferentes muestras celulares según los gradientes de la densidad y solidificar nuestros conocimientos ya que al momento de realizar la ejecución de la práctica se debe respetar las diferentes normas de bioseguridad para no contaminarnos ni contaminar la muestra de la cual se desea resultados positivos

En esta práctica se puede tener muchos problemas al momento de realizarla ya que si no maneja bien la pipeta todo nos saldrá mal al momento de colocar las diferentes sustancias y los resultados serán erróneos de manera que será un trabajo invalido

3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL:

• Separar fracciones celulares específicas a través preparaciones de gradientes de concentración de sacarosa, para estudio de particulares organelas celulares.

3 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Manipular correctamente los materiales previstos para realizar la práctica.

• Instruirse en el proceso correcto al momento de la colocación de las diferentes muestras

• Manejar correctamente las medidas de bioseguridad en el laboratorio

4. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA

4.1CENTRIFUGACION POR GRADIENTE DE DENSIDAD

Es un procedimiento que se suele realizar usando la centrífuga, consiste en la separación de las partículas en función de su densidad de flotación. Así la muestra se dispone por encima o se mezcla con un gradiente de densidad puede ser una concentración elevada de sacarosa, de esta manera se logra separar los elementos a centrifugar. (1)

4.2 LA SACAROSA

La sacarosa es el termino apropiado para describir al azúcar común, se mezclan 2 azucares simples como la glucosa y fructosa se combinan para formar el hidrato de carbono también conocido como sacarosa. Se utiliza también para endulzar los alimentos y ofrece al consumidor un impulso de energía. La sacarosa es incolora e inodora y tiene un sabor dulce. (2)

4.3 PLASMA

El plasma es salado, arenoso y de color amarillento traslúcido, es una fracción liquida y a celular de la sangre esta se obtiene al dejar a la sangre desprovista de células como los glóbulos rojos y los glóbulos blancos. Están compuestas por el 90% de agua un 7 % de proteínas y el 3 & restante de grasa, glucosa, vitaminas. (3)

4.4 ROJO DE METILO.

El rojo de metilo es un indicador de PH que actúa entre PH 4,2 y 6.3 variando desde el rojo que es el pH 4.2 el amarillo pH 6.3. El rojo de metileno se prepara con 0.1 g de este reactivo en 1500 ml de metanol. (4)

5. MATERIALES Y METODOS

Se prepara todos los materiales que se va utilizar durante la práctica para realizarla sin ninguna interrupción y de manera adecuada respetando las normas de bioseguridad.

5.1 PREPARACION DE LA MUESTRA SANGRE.

Se lleva un tubo de tapa lila con sangre luego esta muestra se coloca en la centrifuga a 3000 revoluciones por minuto durante 10 minutos.

Después se coge con la pipeta las células blancas y se

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