Determinación por fotocolorimetría de proteínas en el suero sanguíneo

 Determinación por fotocolorimetría de proteínas en el suero sanguíneo.

Maria Jose Giraldo Vallejo, Andres Felipe Ocampo

1. Introducción.

Las proteínas son el principal componente de las  estructuras de las células  y  compuesto en los mecanismos de reacción, poseen numerosas funciones dentro del organismo y múltiples características, son sustancias nitrogenadas siendo este contenido en un medio del 16%.  (Gil, 2005). Forman parte integral del protoplasma y núcleo de todas las células y son componentes esenciales del plasma sanguíneo por su alto grado de especificidad en el desempeño de las funciones  primordiales en el mantenimiento de la vida. (Otero, 1950).

Las proteínas son macromoléculas formadas por cadenas de unidades de aminoácidos los cuales se unen por enlaces peptídicos entre los grupos carbono y ánimo con pérdida de agua. También tienen importancia nutricional aunque en menor medida. (Gil, 2005).  

Por otra parte la albúmina también llamada proteína globular es una proteína soluble en agua por lo tanto esta se digiere fácilmente, contiene una alta proporción de aminoácidos esenciales,  está presente en la sangre, la clara de huevo, la leche y otras sustancias y su principal objetivo es transportar, mantener el equilibrio y la presión coloidosmótica del plasma. (Guerra, 2020).

Para esta práctica se utilizó como concentración la albúmina que es la proteína plasmática más común y representa aproximadamente el 54.13% del peso neto de las proteínas plasmáticas. Su función es mantener la presión que regula la distribución de líquido corporal entre los compartimientos intravasculares y extravasculares y es responsable de transportar ácidos grasos (Montoya, 2018) 

Para reconocer y determinar la cantidad de proteínas y albúmina que se puede tener en la sangre, cabe destacar que existen varios métodos, por ejemplo. La fotocolorimetría es una técnica distintiva, esta técnica se utiliza con mayor frecuencia en términos cuantitativos y se determina las concentraciones de las sustancias por eso se trabaja aplicando la ley de Beer que cumple con la siguiente ecuación:

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  Ecuación 1. 

Donde A es la Absorbancia, b es la longitud de la celda, ε es la absortividad molar (depende de la sustancia y de la longitud de onda) y C la concentración de la sustancia. La ley de Beer asume una dependencia estrictamente lineal de la absorbancia de la concentración. Por lo general, las interacciones químicas y la imperfección instrumental son responsables de las desviaciones experimentales de esta linealidad. (Mayerhöfer & Popp, 2019).

El método que utilizamos para el aislamiento y la purificación de las proteínas fue la centrifugación, es una técnica que nos permite separar sustancias de tienen diferentes tamaños o masas, ya que presenta diferente velocidad de sedimentación o precipitación cuando se someten a una fuerza centrífuga. (Martin, 1982).

Frente a los resultados cuantitativos de la práctica tenemos la curva de absorción del suero en la zona ultra ultravioleta es la suma de las distintas curvas, cuyo sumando más importante es la curva desnuda a las proteínas, también contribuye en la curva total, la absorción debida a los otros componentes del plasma. (Otero, 1950).

2. Materiales y métodos

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Figura 1. Separación de las globulinas del suero. Elaboración propia

Figura 2. Separación de la solución de proteínas totales. Elaboración propia[pic 4]

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Figura 3. Medición de absorbancia de las soluciones de proteínas. Elaboración propia

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Figura 4. Preparación de la curva de calibración de albúmina. Elaboración propia

3. Resultados y Discusión

En la tabla #1 se presentan los datos obtenidos de la absorbancia de las soluciones.

Tabla 1. Datos de absorbancia de soluciones. Elaboración propia

En la gráfica #1, se presenta la curva de calibración, la cual es útil para el cálculo de concentraciones a partir de un dato de absorbancia o viceversa. Esto es posible gracias a la ecuación de la recta que se genera:

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