AMILASA EN SUERO SANGUINEO
Enviado por lcornelas • 11 de Noviembre de 2013 • 331 Palabras (2 Páginas) • 470 Visitas
AMILASA EN SUERO SANGUÍNEO
El almidón reacciona con el yodo y forma un compuesto de color azul que se mide colorimétricamente. La digestión del almidón por la amilasa dismunuye la intensidad del color azul.
La reacción se basa en la acción de la enzima amilasa en un volúmen fijo de suero sobre una cantidad fija de almidón en condiciones estandar; luego se mide la cantidad de almidón hidrolizado adicionando yodo, determinando en el fotocolorímetro la disminución del color azúl por comparación con el sustrato control.
REACTIVOS
Solución de almidón:
Almidón soluble 0.04 g aforar a 100ml y calentar a ebullición agitando consatantemente.
Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Solucion amortiguadora de fosfatos 0.15M a pH 7.0
Solución concentrada de yodo 0.1 N
Yadato de potasio 0.3567 g
Yoduro de potasio 4.5 g
Ácido clorhídrico concentrado 0.9 ml
Agua destilada 100 ml
Se disuelve el yadato de potasio y el yoduro en 80 ml de agua. Se agrega lentamente y agitando el HCl y se lleva a volúmen con agua destilada
Solución diluida de yodo 0.01 N
Fluoruro de sodio 2 g
Solución de yodo 0.1 N 5 ml
Aforar con agua destilada a 50 ml. (conservar en refrigeración en frasco color ambar)
Colocar los reactivos como se indica en el cuadro siguiente:
REACTIVOS TUBO PROBLEMA TUBO CONTROL
Solución de almidón 1 ml 1 ml
Solución amortiguadora 1ml 1ml
Incubar 5 minutos a 37 ° C NO
Suero problema 0.02 ml (20l) seguir incubando por 7 minutos más exactamente NO
Solución de yodo diluida 0.01 n 1 ml 1ml
Agua destilada 8 ml 8 ml
Mezclar perfectamente y reposar por 10 minutos, leer en el fotocolorímetro 660 nm usando blanco de agua.
Cálculos:
El factor 800 se deduce teniendo en cuenta:
En 100 ml de solución de almidón hay 0.04 g (40 mg) de almidón, en 1 ml de esta solución hay 0.0004 g de almidón (0.4mg)
Si 0.02 ml de suero hidrolizan 0.4 mg de almidón 100 ml de suero hidrolizan 2000 mg
Ahora, en 7.5 minutos se hidrolizan 2000 mg de almidón en 30 minutos se hidrolizan 8 000.
Una unidad catalítica de enzima amilasa es la cantidad de enzima que hidroliza 10 mg de almidón. 8000/10= 800 unidades.
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