Artículos Científicos Bioequivalencia De Dos Formulaciones De Amoxicilina-ácido Clavulánico Para Uso Oral En Perros

Artículos científicos

Bioequivalencia de dos formulaciones

de amoxicilina-ácido clavulánico

para uso oral en perros

Recibido el 27 de julio de 2010 y aceptado el 19 de mayo de 2011.

*Departamento de Fisiología y Farmacología, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México.

Av. Universidad 3000, Coyoacán, 04510, México, D.F.

**Departamento de Clínica y Cirugía en Pequeñas Especies, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma

de México. Av. Universidad 3000, Coyoacán, 04510, México, D.F.

***Departamento de Ciencias Pecuarias, Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán, Universidad Nacional Autónoma de México, km 2.5

Carretera Cuautitlán-Teoloyucan, San Sebastián Xhala, 54714, Cuautitlán Izcalli, Estado de México.

Autor responsable de correspondencia: Dr. Héctor Sumano, Tel.: + 52 55 56-22-59-80, Fax: + 52 55 56-22-59-80, Correo electrónico:

sumano@servidor.unam.mx

Key words: AMOXICILLIN, CLAVULANATE ACID, ß-LACTAM, DOGS, PHARMACOKINETICS, TABLETS.

Resumen

El objetivo de este trabajo fue determinar la bioequivalencia entre dos preparados comerciales de amoxicilina-ácido clavulá-

nico disponibles en forma de tableta para uso oral en perros, y cuyo intervalo de dosificación indicado por los fabricantes es

de 12 horas. Se calculó el perfil farmacocinético de cada preparado, a una dosis oral de 12.5 mg/kg de amoxicilina y ácido

clavulánico en doce perros adultos mediante un modelo cruzado. Se determinó la concentración activa de la combinación de ambos fármacos en cada muestra de plasma, utilizando un método de análisis microbiológico por difusión en agar. El cálculo farmacocinético se llevó a cabo con un modelo no compartamental y los valores obtenidos se analizaron mediante un ANDEVA y prueba T de Bonferroni, con una P < 0.05. Tomando en cuenta las pautas internacionales, la formulación genérica resultó no ser bioequivalente a la de referencia. Esto es, se obtuvieron valores de AUC0-∞ 9.08 ± 0.26 µg h/ml y Cmax 5.48 ± 0.19 µg/ml para el genérico vs AUC0-∞ 13.28 ± 0. 30 µg h/ml y Cmax 2.9 ± 0.17 µg/ml para el de referencia. Si se considera un punto de inflexión para bacterias susceptibles, de 0.25 µg/ml, el preparado genérico requiere un intervalo de dosificación de ocho horas.

Palabras clave: AMOXICILINA, ÁCIDO CLAVULÁNICO, BETA-LACTÁMICOS, PERROS, FARMACOCINÉTICA, TABLETAS.

Introducción

En la actualidad los antibióticos ß-lactámicos son utilizados con frecuencia en la clínica de

Pequeñas especies. Especialmente se recurre a la amoxicilina (AMX) para tratar algunas infecciones respiratorias, urinarias y de piel.

Una estrategia para mitigar el desarrollo de cepas bacterianas resistentes a la amoxicilina consiste en administrarla en combinación con ácido clavulánico (en su forma estable, clavulanato de potasio [PC]). Éste forma complejos que inactivan de forma irreversible las ß-lactamasas producidas por bacterias, por medio de enlaces covalentes.

En numerosas especies, incluyendo humanos, la AMX y el PC tienen un comportamiento farmacocinético similar, es decir, vida media de eliminación (T1/2ß) = 1.27 ± 0.20 h; 1.03 ± 0.1 h, respectivamente. Tiempo en el que se alcanza la concentración plasmática máxima (Tmax) = 1.50h y 1.03 h para AMX y PC respectivamente,5 lo que demuestra que representan una combinación congruente farmacocinéticamente adecuada contra una gran variedad de cepas bacterianas.

Durante algún tiempo, las formulaciones convencionales de AMX/PC se administraban en humanos a una dosis de 500/125 mg, tres veces por día.

Posteriormente se introdujeron preparaciones indicadas para su administración cada 12 horas con gran éxito en el mercado. En el caso del área veterinaria, una formulación comercialmente disponible para perros* está indicada por el fabricante para ser administrada dos veces al día a una dosis de 12.5 mg/kg. A pesar de que la compañía farmacéutica no lo especifica, dicho intervalo de dosificación implica que se trata de un sistema de liberación modificada, que hace posible el intervalo de dosificación dicho. Luego de una amplia búsqueda en la literatura formal, a través de bases de datos digitales (Agrícola, MedLine, VETCD, Agris, y otras) no se encontraron estudios que describan la farmacocinética oral de preparados de AMX/PC de larga acción en perros, como ocurre en humanos.

A pesar de que sí existen estudios farmacocinéticos de tabletas convencionales.

Por otro lado, es importante destacar que se ha observado una notable disminución en la capacidad de absorción de la AMX en las partes distales del tubo gastrointestinal (TGI) y es probable que esta característica también se presente en perros. Sin embargo, las diferencias entre humanos y perros en cuanto al tiempo de vaciamiento gástrico, tránsito gastrointestinal y variación del pH en los diferentes segmentos, 10,11podría causar modificaciones de gran importancia en la tasa de absorción de ambos fármacos. Como consecuencia, la simple extrapolación de una formulación de AMX/PC de larga acción utilizada en humanos, podría no producir en perros los mismos perfiles favorables que se obtienen en plasma con estos antibióticos considerados tiempo-dependientes.

Con frecuencia, los clínicos de pequeñas especies eligen una marca de preparados de AMX/PC con base en consideraciones de costo, sin tomar en cuenta criterios de intercambiabilidad y bioequivalencia, requisito que aún no se exige en algunos países. En México, por ejemplo, a la fecha de realización de este trabajo, los estudios de bioequivalencia todavía no eran obligatorios para registrar un medicamento, por lo que la clasificación de genérico no era real en muchos casos, como se observa también en otros países en desarrollo.

Por lo antes mencionado, el objetivo de este estudio es definir la concentración plasmática de las fracciones activas de AMX/PC del preparado de referencia* y comparar los datos obtenidos en un estudio de bioequivalencia, contra un preparado genérico, ambos indicados dos veces al día en perros.

Material y métodos

Este trabajo se llevó a cabo bajo los lineamientos de la Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, dentro de las instalaciones del Departamento de Fisiología y Farmacología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Autónoma de México. El análisis farmacocinético se realizó después de una dosis oral (PO) de 12.5 mg/kg de AMX y PC (en una proporción de 4:1) en doce perros mestizos, mediante un modelo cruzado (6 × 6). Las formulaciones comerciales se obtuvieron directamente de un distribuidor, esto es, el grupo de referencia (GR) con Clavamox® y el grupo genérico (GG) con un preparado cuyo fabricante no autorizó que se revelara el nombre comercial, pero sí es una especialidad farmacéutica comercializada en México.

La administración oral de cada preparado se llevó a cabo utilizando una pieza de aproximadamente 5 g de salchicha comercial para ocultar las tabletas en su interior. Se utilizaron doce perros mestizos clínicamente sanos cuya edad osciló entre los 3 y 9 años (7 machos y 5 hembras) y cuyo peso promedio fue de 17.3 ± 1.8 kg. Los animales fueron desparasitados con un producto comercial de ivermectina-prazicuantel** y se les alimentó con una fórmula seca para adultos*** ad limitum, y durante 15 días se les permitió adaptarse a su nuevo entorno en jaulas individuales de 2 × 3 m, con acceso libre a agua fresca y alimento. El estudio se diseñó como un modelo ruzado (6 × 6) con un periodo de depuración de 10 días.

Con la finalidad de disminuir las variaciones de la tasa de absorción, todos los animales fueron privados de alimento desde ocho horas antes y hasta una hora después de la dosificación. Se pesó a cada perro antes de la dosificación y se ajustaron las tabletas comerciales de 250 mg de AMX/PC al peso de cada perro, utilizando una navaja para raspar el excedente. La dosis establecida fue de 12.5 mg/kg de AMX y PC, como lo recomienda el fabricante del producto de referencia.

En la vena cefálica de cada perro se colocó un catéter heparinizado núm. 20,* de 3 pulgadas y se les colocó un collar isabelino para evitar que se retiraran el catéter. Se obtuvieron 3 ml de sangre en los siguientes tiempos de muestreo pos-administración: 0.16, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 8, 10 y 12 h. Las muestras de sangre se centrifugaron inmediatamente a 3000 g, se recolectó el plasma de cada tubo, se identificaron y se congelaron en nitrógeno líquido durante 5 días, hasta su análisis. La concentración/actividad de AMX/PC se determinó en cada muestra de plasma por triplicado, utilizando el análisis cuantitativo/cualitativo de difusión en agar, descrito por Bennett et al., 12 el cual mide la concentración en términos de la actividad antibacteriana in vitro del fármaco o combinación. Se utilizó una cepa sensible de Bacillus subtilis como microorganismo de referencia, a una concentración de 5 × 105 ufc/ml en agar Müeller-Hinton, ** enriquecido con 0.1 ml de plasma de perro como muestra estándar.

El porcentaje de recuperación logrado con esta técnica fue de 98 ± 2.5%. El límite de cuantificación fue de 0.07 μg/ml, que correspode a un halo de inhibición de 9.9 mm de diámetro, y se midió con un calibrador electrónico. Este valor corresponde al límite inferior de la línea de calibración, cuyo coeficiente de correlación de la solución estándar de AMX/PC (4:1) fue de 0.98, calculado mediante regresión linear con el programa Origin

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