Extraccion De RNA

HIPÓTESIS.

El alumno adquirirá conocimiento acerca de la extracción de ARN teniendo como base los conocimientos adquiridos en la parte teórica de la materia.

OBJETIVO.

Que el alumno desarrolle la habilidad para la extracción del RNA total partir de Liofilizado de Saccharomyces boulardii (Floratil®)

INTRODUCCIÓN.

En los organismos celulares el ARN es la molécula encargada de dirigir la síntesis de proteínas, pues aunque el ADN es el que contiene la información que determina la estructura de estas, no puede actuar solo y se vale del ARN para traducir esta información y producir las proteínas necesarias para el desarrollo y actividades de la célula.

El azúcar presente en el RNA es la ribosa. Esto indica que en la posición 2' del anillo del azúcar hay un grupo hidroxilo (OH) libre. Por este motivo, el RNA es químicamente inestable, de forma que en una disolución acuosa se hidroliza fácilmente.

El RNA es la única molécula biológica con capacidad informativa y actividad enzimática. Las células contienen distintos tipos de RNA que juegan papeles específicos en la fisiología celular: El mRNA y el tRNA son intermediarios en la transmisión de la información genética en la célula; el rRNA juega un importantísimo papel en la traducción del mensaje genético como componente fundamental del ribosoma; otros RNAs con actividad catalítica (ribozimas) participan en distintas funciones celulares y finalmente, los sRNAs (small RNAs) son moléculas pequeñas descubiertas recientemente que participan en la regulación de la expresión génica.

Fundamento:

El ARN de levadura se obtiene extrayendo un homogenizado de células con fenol. La solución concentrada de fenol rompe los enlaces de hidrógeno en las macromoléculas, causando desnaturalización de las proteínas. La suspensión turbia se centrifuga y aparecen dos fases: la fase inferior de fenol contiene ADN y la fase superior acuosa contiene glúcidos y ARN. La proteína desnaturalizada se halla presente en ambas fases y puede removerse por centrifugación. El ARN precipita luego con etanol. El producto obtenido no contiene ADN pero generalmente está contaminado con polisacárido que se puede tratar con amilasa para mejorar la purificación.

PROCEDIMEINTO.

RESULTADOS.

P= A260/(A280 )=>1.70

Eq.2

P= 0.100/0.059=1.69

Eq. 4

P= 0.150/0.094=1.59

DISCUSION DE RESULTADOS.

Tiocianato de guanidinio: compuesto químico utilizado como degradante de proteínas en general.

Cloroformo- alcohol- isoamílico: precipitación de preoteínas.

Isopropanol: precipita el RNA.

Etanol: purifica el ARN.

Fenol ácido pH 4.5: purificación de RNA.

Absorbancias:

De acuerdo a los resultados obtenidos después de realizar el cálculo para la pureza del RNA se observa que la muestra del equipo 2 se puede considerar que el RNA es puro ya que esta aproximado al rango de criterio para la pureza al 100%, mientras que la muestra del equipo 4 se puede tomar como que el RNA estaba un poco contaminado por proteínas o porque se desestabilizo el ARN ya que este es muy delicado en su manipulación.

CONCLUSIÓN.

Al finalizar la práctica se concluye que la extracción del RNA es más delicada que la del DAN ya que este ácido nucleico es más delicado que DNA, por otra parte se cumplió nuestro objetivo.

CUESTIONARIO.

¿Cuáles son los tipos de RNA y cuáles son sus funciones?

Mensajero (ARNm); portador de la información de los genes para la síntesis de proteínas, de forma lineal.

Ribosomal (ARNr); asociado a proteínas forma los ribosomas, tiene estructura secundaria de doble hélice en algunas zonas.

...